Extração de Bactérias Apoplásticas Usando um Método de Pressão Baseado em Seringa

Pegue uma planta de Arabidopsis com folhas pré-inoculadas com bactérias para estudar as interações planta-microrganismo.

Essas bactérias proliferam no apoplasto, o espaço intercelular entre as células vegetais, formando microcolônias.

Uma vez estabelecida a colonização apoplástica, retire-se as folhas e coloque-as em uma seringa sem agulha.

Adicione água destilada para cobrir o papel.

Insira o êmbolo, segure a seringa na vertical, toque nela e ajuste o êmbolo para liberar qualquer ar preso.

Sele a ponta com parafilme para criar uma câmara fechada para extração por apoplasto.

Aplique pressão positiva empurrando o êmbolo até que o tecido escureça, indicando compressão e entrada de água nos espaços intercelulares para desalojar bactérias.

Em seguida, aplique pressão negativa puxando o êmbolo para expandir a matriz do tecido e extrair fluidos e bactérias.

Repita os ciclos de pressão para gerar forças de cisalhamento que interrompem as microcolônias, liberando bactérias sem danificar o tecido vegetal.

Deslaque a seringa e recolha o fluido apoplástico contendo bactérias dispersas para análise posterior.

Quatro dias após a inoculação, corte a parte aérea da planta Arabidopsis ou a folha inoculada d