Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:28 min. • November 28th, 2025
Pegue uma planta de Arabidopsis com folhas pré-inoculadas com bactérias para estudar as interações planta-microrganismo.
Essas bactérias proliferam no apoplasto, o espaço intercelular entre as células vegetais, formando microcolônias.
Uma vez estabelecida a colonização apoplástica, retire-se as folhas e coloque-as em uma seringa sem agulha.
Adicione água destilada para cobrir o papel.
Insira o êmbolo, segure a seringa na vertical, toque nela e ajuste o êmbolo para liberar qualquer ar preso.
Sele a ponta com parafilme para criar uma câmara fechada para extração por apoplasto.
Aplique pressão positiva empurrando o êmbolo até que o tecido escureça, indicando compressão e entrada de água nos espaços intercelulares para desalojar bactérias.
Em seguida, aplique pressão negativa puxando o êmbolo para expandir a matriz do tecido e extrair fluidos e bactérias.
Repita os ciclos de pressão para gerar forças de cisalhamento que interrompem as microcolônias, liberando bactérias sem danificar o tecido vegetal.
Deslaque a seringa e recolha o fluido apoplástico contendo bactérias dispersas para análise posterior.
Quatro dias após a inoculação, corte a parte aérea da planta Arabidopsis ou a folha inoculada da planta de feijão e coloque-a em uma seringa de 20 mililitros sem agulha.
Para folhas de feijão, role a folha sobre si mesma, deixando a face abaxial para fora. Adicione volume suficiente de água destilada para cobrir o tecido. Depois, insira o êmbolo que segura a seringa em posição vertical e remova o excesso de ar e bolhas de ar dentro da seringa, batendo suavemente no cano até que todo o ar fique próximo à ponta e, após remover o ar, cubra a ponta do corpo da seringa com filme de parafina.
Agora pressione cuidadosamente o êmbolo para gerar pressão positiva até que o tecido escureça. Depois, puxe o êmbolo para gerar pressão negativa. Remova o filme de parafina e o êmbolo e recolha o fluido contendo as bactérias extraídas do apoplasto.