Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:45 min. • March 31st, 2026
Veja C. Vermes elegans cultivados em placas de ágar ricas em nutrientes contendo E. coli para a condição controle e Pseudomonas aeruginosa para a condição do patógeno.
Durante a incubação, os vermes se alimentam de bactérias que colonizam o lúmen intestinal.
No controle, o epitélio intestinal permanece intacto, enquanto as toxinas liberadas pelo patógeno causam danos epiteliais.
Lave as minhocas com um tampão e transfira para placas suplementadas com traçadores fluorescentes e bactérias inativadas por calor como fonte de alimento.
No controle, os traçadores fluorescentes ingeridos permanecem no intestino, enquanto nos vermes infectados por patógenos, eles cruzam o epitélio danificado e entram na cavidade corporal.
Lave as minhocas novamente e coloque-as em pratos novos. Depois, transferi-as para uma placa de ensaio multipoço contendo um fixador para preservar a estrutura celular.
Remova o fixador. Depois, adicione um suporte de montagem para imagem.
Observe usando um sistema de imagem de fluorescência.
Aumento da fluorescência na cavidade corporal de P. Vermes expostos a aeruginosa indicam permeabilidade intestinal induzida pelo patógeno.
Lave as larvas L4 sincronizadas com a idade com S-buffer e transfira aproximadamente 500 vermes para as placas NGM contendo diferentes bactérias e substâncias químicas. Depois, incube as placas a 20 graus Celsius por 48 horas.
Prepare as placas suplementadas com FITC-dextran misturando 2 mililitros de E inativado por calor. coli com quatro miligramas de FITC-dextran. Adicione 100 microlitros da mistura a cada uma das 20 placas de ágar NGM frescas e deixe as placas secarem por 1 hora em uma bancada de laboratório limpa. Após 48 horas de tratamento, lave as minhocas com S-buffer, transfira-as para placas suplementadas com FITC-dextran e para placas NGM sem FITC-dextran, e incube as placas durante a noite.
No dia seguinte, lave as minhocas com S-buffer e deixe-as rastejar na placa de ágar NGM fresca por 1 hora. Adicione 50 microlitros de formaldeído a 4% em cada poço de uma placa preta, com 96 poços, de fundo plano, e transfira aproximadamente 50 minhocas para cada poço. Após 1 a 2 minutos, remova todo o formaldeído e adicione 100 microlitros de meio de montagem em cada poço.