JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:45 min • March 31st, 2026
Veja C. Vermes elegans cultivados em placas de ágar ricas em nutrientes contendo E. coli para a condição controle e Pseudomonas aeruginosa para a condição do patógeno.
Durante a incubação, os vermes se alimentam de bactérias que colonizam o lúmen intestinal.
No controle, o epitélio intestinal permanece intacto, enquanto as toxinas liberadas pelo patógeno causam danos epiteliais.
Lave as minhocas com um tampão e transfira para placas suplementadas com traçadores fluorescentes e bactérias inativadas por calor como fonte de alimento.
No controle, os traçadores fluorescentes ingeridos permanecem no intestino, enquanto nos vermes infectados por patógenos, eles cruzam o epitélio danificado e entram na cavidade corporal.
Lave as minhocas novamente e coloque-as em pratos novos. Depois, transferi-as para uma placa de ensaio multipoço contendo um fixador para preservar a estrutura celular.
Remova o fixador. Depois, adicione um suporte de montagem para imagem.
Observe usando um sistema de imagem de fluorescência.
Aumento da fluorescência na cavidade corporal de P. Vermes expostos a aeruginosa indicam permeabilidade intestinal induzida pelo patógeno.
Lave as larvas L4 sincronizadas com a idade com S-buffer e transfira aproximadamente 500 vermes para as placas NGM contendo diferentes bactérias e substâncias químicas. Depois, incube as placas a 20 graus Celsius por 48 horas.
Prepare as placas suplementadas com FITC-dextran misturando 2 mililitros de E inativado por calor. coli com quatro miligramas de FITC-dextran. Adicione 100 microlitros da mistura a cada uma das 20 placas de ágar NGM frescas e deixe as placas secarem por 1 hora em uma bancada de laboratório limpa. Após 48 horas de tratamento, lave as minhocas com S-buffer, transfira-as para placas suplementadas com FITC-dextran e para placas NGM sem FITC-dextran, e incube as placas durante a noite.
No dia seguinte, lave as minhocas com S-buffer e deixe-as rastejar na placa de ágar NGM fresca por 1 hora. Adicione 50 microlitros de formaldeído a 4% em cada poço de uma placa preta, com 96 poços, de fundo plano, e transfira aproximadamente 50 minhocas para cada poço. Após 1 a 2 minutos, remova todo o formaldeído e adicione 100 microlitros de meio de montagem em cada poço.
Este protocolo demonstra a avaliação da permeabilidade intestinal em C. elegans após exposição a patógenos bacterianos. Compreender como as bactérias afetam a integridade intestinal é crucial para obter insights sobre as interações entre hospedeiro e patógeno.
A avaliação quantitativa da permeabilidade intestinal em C. elegans após exposição bacteriana fornece um modelo robusto para investigar a integridade da barreira epitelial sob desafio patogênico. Este ensaio baseado em fluorescência permite a validação precoce de alvos e a redução de riscos mecanicistas em estudos de interação hospedeiro-patógeno, oferecendo confiança preditiva na pesquisa pré-clínica. A abordagem é diretamente relevante para equipes de biofármacos que buscam continuidade translacional da biologia da descoberta à modelagem de sistemas relevantes para doenças.
Este ensaio de permeabilidade baseado em fluorescência insere-se no continuum de descoberta a pré-clínico, conectando estudos mecanicistas iniciais e o desenvolvimento de modelos translacionais.
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Última atualização: 22 agosto 2026