Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:17 min. • March 31st, 2026
Comece com Streptococcus pneumoniae cultivado em biofilme, um colonizador nasofaríngeo assintomático, suspenso em um tampão
Administre a suspensão intranasal a um rato não anestesiado, permitindo a inalação no trato respiratório superior.
No epitélio nasofaríngeo, as bactérias estabelecem um biofilme que facilita a colonização e suprime a produção de citocinas antivirais pelas células hospedeiras.
Após a anestesiação, estenda a língua do camundongo para acessar a traqueia.
Administre o vírus da influenza A na traqueia para infectar o trato respiratório inferior.
Após a recuperação do camundongo, inocule imediatamente o vírus intranasal para atingir o trato respiratório superior.
A infecção viral desregula o sistema imunológico do hospedeiro e danifica o tecido mucoso, desencadeando a dispersão bacteriana para o trato respiratório inferior.
No ambiente pulmonar alterado pelo vírus, as bactérias fazem a transição para patógenos invasores, induzindo inflamação pulmonar e disseminação sistêmica.
A infecção também suprime a função dos neutrófilos, reduzindo a eliminação bacteriana.
Esse modelo de co-infecção permite a investigação das interações hospedeiro-microrganismo.
Descongele as alíquotas cultivadas em biofilme no gelo e fie a 1.700 g por cinco minutos. Remova e descarte cuidadosamente o sobrenadante sem atrapalhar a bola. Depois, lave o pellet resuspendendo-o em 1 mililitro de PBS e gire novamente. Remova o sobrenadante e resuspenda o pellet no volume necessário para atingir a concentração desejada.
Inocule o camundongo preto C57 seis machos por via intranasal com 5 vezes 10 até a sexta unidade formadora de colônia ou CFU, pipeteando 5 microlitros do inóculo diluído em cada naris. Após a inoculação, segure o rato firmemente, estabilizando a cabeça até que o volume seja inalado. Uma vez que o vírus tenha descongelado, dilua-o no PBS até a concentração desejada.
Coloque lubrificante oftálmico nos olhos do camundongo antes da anestesia. Infecte imediatamente o camundongo anestesiado com 50 microlitros de 20 unidades formadoras de placa, ou PFU, do vírus da influenza A ou IAV intratraquealmente, usando pinças sem filo para puxar a língua da boca e pipetar o volume de líquido pela traqueia. Após a recuperação, inocule intranasal 10 microlitros de 200 UFP de IAV usando o método de inoculação descrito anteriormente.