Name: Isolamento mitocondrial do músculo esquelético (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-30T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Aprenda a isolar mitocôndrias do músculo esquelético e medir a respiração mitocondrial por oxigrafia. Este método permite avaliar o consumo de oxigênio em diferentes estados respiratórios para estudos de metabolismo.

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Este trabalho foi financiado por uma concessão do National Eye Institute (R01 EY12998) para FH Andrade.

1. Preparação de Buffers <ol><li> Ligue 5804R centrífuga e definir a 4 ° C. Ligue Isotemp banho de água 3006D e definida para 37 ° C. </li><li> Preparar as soluções seguintes antes de isolamento muscular: <ul><li> PBS: Dissolver tampão fosfato salino (PBS) comprimidos em água destilada (5 comprimidos / litro). Misture bem. </li><li> PBS acrescido de 10 mM EDTA: Para preparar uma solução de 100 ml, adicionar 2 ml de 500 mM EDTA a 98 ml de PBS. </li><li> Buffer de mitocôndrias 8X: 10,28 g de sacarose para uma concentração final de 0,6 M, 400 mg de ácido graxo livre-albumina sérica bovina (BSA) para uma concentração final de 0,8%, 2,08 g de HEPES para uma concentração final de 160 mM, pH para 7,4 e QS de 50 ml com água destilada. </li><li> Tampão de isolamento 1 (IB1): Adicione 200 mL de 500 mM EDTA para uma concentração final de 10 mM, 0,392 g de D-manitol para uma concentração final de 215 mM, 1,25 ml de 8X mitocôndrias tampão pH, para 7,4 e QS a 10 ml com água destilada. </li><li> Tampão de isolamento 2 (IB2): Adicionar 60 mL de 500 mM EGTA para uma concentração final de 3 mM, 0,392 g de D-manitol para uma concentração final de 215 mM, 1,25 ml de 8X mitocôndrias tampão pH, para 7,4 e QS a 10 ml com água destilada. </li><li> Tampão Experimental (EB): Adicionar 100 l de 500 mM MgCl 2 para uma concentração final de 5 mM, 0,392 g de D-manitol para uma concentração final de 215 mm, 25 mL de 2,5 mM KH 2 PO 4 para uma concentração final de 6,25 mM, 2 l de 100 mM EGTA para uma concentração final de 20 mM, 1,25 ml de tampão mitocondrial, pH de 7,4 e QS a 10 ml com água destilada. </li></ul></li></ol> 2. Isolamento muscular <ol><li> Em um balde de gelo, colocar três copos de 10 ml, moedores Potter-Elvehjem tecido e todos os outros instrumentos necessários / supplies no gelo. Tudo deve ficar gelada durante todo o experimento. </li><li> Lugar IB1 e IB2 em balde de gelo e EB em banho de água quente quando terminar. </li><li> Nos três copos 10 ml, as seguintes soluções devem ser adicionadas: <ul><li> Copo 1: 10 ml de PBS </li><li> Copo 2: 10 ml de PBS / EDTA </li><li> Copo de 3: 3 ml de IB1 </li></ul></li><li> Matar um rato humanamente aprovado pelo seu Animal Care locais Institucional e Comitê de uso. </li><li> Isolar rapidamente 250-500 mg de músculo esquelético, lavar em uma taça, e transferir para Beaker 2. </li></ol> 3. Homogeneização / isolamento mitocondrial <ol><li> Transferência de músculo para copo de 3 e finamente picada do músculo com uma tesoura. </li><li> Transferir a solução para o homogeneizador Potter-Elvehjem. Homogeneizar o músculo usando um pilão motorizado (uma imprensa de broca irá fazer o trabalho) 10 vezes mantendo o tubo no gelo em todos os momentos. </li><li> Transferência de homogenato de pré-refrigerados tubos de microcentrífuga 2 ml e centrifugar a 700 g por 10 minutos a 4 ° C. </li><li> Transfira o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga novo pré-refrigerados. Descartar pellet. </li><li> Centrifugar o sobrenadante do 10.500 g por 10 minutos a 4 ° C. </li><li> Transfira o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga novo pré-refrigerados e SN1 etiqueta (número sobrenadante 1) e tipo de músculo. </li><li> Re-suspender pellet em 500 mL de IB2. </li><li> Centrifugar a 10.500 g por 10 minutos a 4 ° C. </li><li> Transfira o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga novo pré-refrigerados e SN2 etiqueta (número sobrenadante 2) e tipo de músculo. </li><li> Suspender finais mitocondrial pellet em 100 ml de IB2. </li><li> Re spin-finais suspensão mitocondrial em minifuge por alguns segundos. Se houver um pellet, transferir o sobrenadante para um novo tubo de microcentrífuga pré-refrigerados e descartar o pellet. </li><li> Determinar a concentração de proteína utilizando o ensaio de Bradford 8. </li></ol> 4. Calibração do eletrodo NOTA: calibração do eletrodo Completa durante o isolamento mitocondrial. <ol><li> Adicione 100 ml de água destilada para 250 ml. Mexa vigorosamente por 20 minutos para equilibrar a água com gás atmosférico. </li><li> Adicione algumas gotas de 50% KCl no eletrodo Oxygraph. </li><li> Coloque um pequeno pedaço de papel de Blue Rizla rolando em cima do eletrodo. </li><li> Coloque um pedaço de membrana PTFE em cima do papel para enrolar. </li><li> Aplicar o anel interno utilizando o aplicador de anel e, em seguida, coloque o anel externo na ranhura do eletrodo. </li><li> Conectar eletrodos e montar o resto do equipamento: base maior anel de plástico, câmara mitocondrial, e mangueiras de água. </li><li> Ligar caixas de Oxygraph e começar software Oxygraph. </li><li> Adicione a água equilibrada para a câmara mitocondrial. </li><li> Adicionar agitar bar e ligue a uma velocidade de 60. </li><li> Começar uma nova experiência. </li><li> Clique em calibrar e, em seguida, a calibração de fase líquida para Box 1. Mudança de temperatura para 37 ° C e clique em "OK" duas vezes. </li><li> Quando "Substituir" muda para "OK" clique nele e abrir o tanque de gás nitrogênio. </li><li> Ponta lugar conectadopara o tanque de nitrogênio na câmara e estabelecer oxigênio zero. Clique em "OK" quando se muda de "Ignorar". </li><li> Aspirar água e adicionar 500 mL de tampão EB às câmaras mitocondrial. </li><li> Vedação de câmara com êmbolo. </li><li> Se estiver usando várias caixas, repita os passos 11-15 para calibração de Caixa 2. </li></ol> 5. A respiração mitocondrial <ol><li> Iniciar uma nova experiência; deixá-lo correr por cerca de 1 minuto para estabilizar sinal. </li><li> Adicionar o volume necessário da suspensão mitocondrial (passo 3.11) para 150 mg em cada câmara, o evento marca, e deixá-lo correr por 1 minuto. </li><li> Adicionar 10 ml de morno 250 mM/125 mM glutamato / malato para uma concentração final de 5 mM mM/2.5. Marca e deixar correr por 1 minuto. Esta é definida como estado 2. </li><li> Adicionar 7,5 mL de 10 mM ADP para uma concentração final de 150 mM, marca, e deixar correr por 30 segundos. Isto é definido como Estado 3. </li><li> Adicionar outro mL 7,5 mM ADP, de 10, marca, e deixar correr para 1,5 minutos. </li><li> Adicionar 0,5 mL de oligomicina mM frio 10 para uma concentração final de 1 mM, marca, e deixar correr por 3 minutos. Isto é definido como Estado 4. </li><li> Adicionar 1 ml de frio 0,1 mM FCCP para uma concentração final de 0,2 mM, marca, e deixar correr por 3 minutos. Isto é definido como Estado 5. </li><li> Quando terminar, final experimentar e salvar. </li><li> Adquirir taxas de respiração usando software Oxygraph. </li><li> Digite fator de normalização: se a adição de 150 mg de proteína mitocondrial, o fator de normalização será 0,15. </li><li> Calcular as taxas de respiração normalizada para os estados de respiração diferente. </li><li> Calcular a Razão de Controle Respiratório (RCR) dividindo-se 3 por Estado Estado 4. </li></ol> 6. Resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/2452/2452fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Mostra um representante rastreamento do consumo de oxigênio pelo músculo esquelético mitocôndrias. Após o sinal de eletrodo é estabilizado, a amostra mitocôndria é adicionado à câmara Oxygraph. Estado respiração 2 começa com adição de glutamato e malato. Adição de ADP aumenta o consumo de oxigênio, que define a respiração estado 3. ATP sintase é bloqueada pela adição de oligomicina para obter a respiração estado 4. Finalmente, FCCP é adicionado ao desacoplar respiração mitocondrial (estado 5). Tabela 1 mostra as taxas de consumo de oxigênio representante para os estados 2, 3, 4 e 5. A relação de controle respiratório (RCR) é calculado para cada experimento. RCR ≥ 4 é considerado como evidência de uma preparação de mitocôndrias viáveis. <table border="1"><tbody><tr><td> Estados </td><td> Preços normalizado </td></tr><tr><td> Estado 2 </td><td> 34,74 </td></tr><tr><td> Estado 3 </td><td> 153,40 </td></tr><tr><td> Estado 4 </td><td> 16,49 </td></tr><tr><td> Estado 5 </td><td> 143,70 </td></tr><tr><td> RCR </td><td> 9,30 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Taxas de respiração mitocondrial. Taxas de consumo Representativeoxygen do músculo esquelético mitocôndrias. Os valores são normalizados para a quantidade de mitocôndrias adicionado à câmara. A relação de controle respiratório (RCR) é determinado pela divisão do estado 3 por estado 4. Um RCR ≥ 4 representa uma preparação viável mitocôndrias.

<ol><li>Frezza, C., Cipolat, S., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organelle+isolation%3A+functional+mitochondria+from+mouse+liver%2C+muscle+and+cultured+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organelle isolation: functional mitochondria from mouse liver, muscle and cultured fibroblasts.</a> Nat Protoc. 2, 287-295 (2007).</li>
<li>Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+mitochondria+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Roles of mitochondria in health and disease.</a> Diabetes. 53, Suppl 1. S96-S102 (2004).</li>
<li>Johannsen, D. L., Ravussin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondria+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondria in health and disease.</a> Curr Opin Pharmacol. , (2009).</li>
<li>Pallotti, F., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+subfractionation+of+mitochondria+from+animal+cells+and+tissue+culture+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and subfractionation of mitochondria from animal cells and tissue culture lines.</a> Methods Cell Biol. 80, 3-44 (2007).</li>
<li>Pallotti, F., Lenaz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+subfractionation+of+mitochondria+from+animal+cells+and+tissue+culture+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and subfractionation of mitochondria from animal cells and tissue culture lines.</a> Methods Cell Biol. 65, 1-35 (2001).</li>
<li>Gamboa, J. L., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+content+and+distribution+changes+specific+to+mouse+diaphragm+after+chronic+normobaric+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial content and distribution changes specific to mouse diaphragm after chronic normobaric hypoxia.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. , (2009).</li>
<li>Patel, S. P., Gamboa, J. L., McMullen, C. A., Rabchevsky, A., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+respiratory+capacity+in+extraocular+muscle+mitochondria%3A+evidence+for+intrinsic+differences+in+mitochondrial+composition+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Lower respiratory capacity in extraocular muscle mitochondria: evidence for intrinsic differences in mitochondrial composition and function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 180-186 (2009).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Nós apresentamos um protocolo para isolar mitocôndrias viáveis ​​do músculo esquelético. Se o rendimento é um problema, o protocolo pode ser modificada, incubando o músculo isolado em 5 ml de tripsina EDTA/0.01 PBS/10mM% por 30 minutos em gelo. Para assegurar a digestão muscular completo com tripsina, o músculo precisa ser totalmente picada. Após a incubação de 30 minutos, a solução de tripsina PBS/10mM EDTA/0.01% deve ser completamente substituído com 3 ml de isolamento tampão 1 (IB1). Além disso, o uso de tripsina pod...

<table><tbody><tr><td>95% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; / 5% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; mistura</td><td>Fornecedor Local de Gases</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sal sódico do adenosina 5&amp;#8242;-difosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2754</td><td></td></tr><tr><td>Papel Blue Rizla</td><td>Hansatech</td><td>890101</td><td></td></tr><tr><td>Ensaio de proteína Bradford</td><td>Bio-Rad</td><td>500-0006</td><td></td></tr><tr><td>Carbonylcyanide p-trifluorometoxifenil-hidrazona (FCCP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga 5804R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitrogênio comprimido</td><td>Fornecedor Local de Gases</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-manitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9647</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenoglicol-bis-tetraacético (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA)</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0728</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sérica bovina com ácidos graxos livres</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8806</td><td></td></tr><tr><td>Ácido glutâmico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5889</td><td></td></tr><tr><td>Sal sódico do HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 3006D</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Ratos machos Sprague Dawley</td><td>Harlan Laboratories</td><td>300-500g</td><td></td></tr><tr><td>Ácido málico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9138</td><td></td></tr><tr><td>Minifuge</td><td>ISC Bioexpress</td><td>C1301P</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O4876</td><td></td></tr><tr><td>Disco do eletrodo de oxigênio</td><td>Hansatech</td><td>S1</td><td></td></tr><tr><td>Oxigrafo</td><td>Hansatech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software Oxygraph Plus V1.01</td><td>Hansatech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medidor de pH</td><td>Mettler Toledo</td><td>1225506149</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8416</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizadores Potter-Elvehjem</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-414-14A</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de PTFE (0,0125 mm &amp;#215; 25 mm)</td><td>Hansatech</td><td>S4</td><td></td></tr><tr><td>Broca SKIL 3320</td><td>Loja de ferragens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento mitocondrial do músculo esquelético

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

As mitocôndrias são organelas controlar a vida ea morte da célula. Eles participam nos principais reações metabólicas, sintetizar a maior parte do ATP, e regular uma série de cascatas de sinalização 2,3. Pesquisadores passadas e actuais, mitocôndrias isoladas de ratos e camundongos tecidos como fígado, cérebro e coração 4,5. Nos últimos anos, muitos pesquisadores se concentraram em estudar a função mitocondrial dos músculos esqueléticos. Aqui, descrevemos um método que temos utilizado com sucesso para o isolamento de mitocôndrias de músculo esquelético 6. Nosso procedimento requer que todos os tampões e reagentes são feitas fresco e precisa de cerca de 250-500 mg de músculo esquelético. Foram estudadas mitocôndrias isoladas de ratos e camundongos gastrocnêmio e diafragma e os músculos extra-oculares de ratos. Concentração de proteína mitocondrial é medido com o ensaio de Bradford. É importante que as amostras mitocondrial ser mantida gelada durante a preparação e que estudos funcionais ser realizada dentro de um prazo relativamente curto (~ 1 hr). Respiração mitocondrial é medida usando polarografia com um eletrodo do tipo Clark (sistema Oxygraph) a 37 ° C 7. Calibração do eletrodo de oxigênio é um passo fundamental neste protocolo e deve ser realizada diariamente. Mitocôndrias isoladas (150 mg) são adicionados a 0,5 ml de tampão experimental (EB). Estado respiração 2 começa com adição de glutamato (5mM) e malato (2,5 mM). Então, difosfato de adenosina (ADP) (150 mM) é adicionado para começar estado 3. Oligomicina (1 mM), um bloqueador sintase ATPase, é usado para estimar o estado 4. Por último, carbonil cianeto de p-[trifluoromethoxy]-fenil-hidrazona (FCCP, 0,2 mM) é adicionado à measurestate 5, ou não atrelados a respiração 6. A relação de controle respiratório (RCR), a relação entre o estado 3 para o estado 4, é calculado depois de cada experimento. Um RCR ≥ 4 é considerado como evidência de uma preparação de mitocôndrias viáveis. Em resumo, apresentamos um método para o isolamento de mitocôndrias viáveis ​​a partir de músculos esqueléticos que podem ser usadas em bioquímica (por exemplo, atividade enzimática, imunodetecção, proteômica) estudos e funcionais (respiração mitocondrial).

Este protocolo descreve um procedimento para estudar a respiração das mitocôndrias isoladas dos músculos esqueléticos. Este método foi adaptado de Scorrano<em&gt; Et al.</em&gt; (2007). O procedimento de isolamento mitocondrial requer cerca de 2 horas. A respiração mitocondrial pode ser concluído em cerca de 1 hora.

Isolamento mitocondrial do músculo esquelético

As mitocôndrias são organelas que controlam a vida e a morte da célula. Elas participam de reações metabólicas fundamentais, sintetizam a maior parte do ATP e ...

O objetivo geral deste procedimento é isolar mitocôndrias e realizar a respiração mitocondrial. Isso é realizado primeiramente isolando músculo esquelético de ratos spray dly. Em seguida, o músculo é homogeneizado e as mitocôndrias são isoladas por centrifugação.A concentração de proteína é então determinada utilizando o ensaio de Bradford. Por fim, a respiração mitocondrial é medida por poligrafia. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram o consumo de oxigênio através dos diferentes estados da respiração mitocondrial.Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do músculo esquelético, como o efeito de diferentes intervenções na função mitocondrial. Embora este método possa fornecer informações sobre o metabolismo do músculo esquelético, ele também pode ser aplicado a outros órgãos, como fígado, cérebro, rim ou praticamente qualquer tecido antes do início do procedimento. Para isolar o músculo esquelético, prepare as seguintes soluções: P-B-S-P-B-S mais 10 milimolares de EDTA, oito vezes o tampão de isolamento de mitocôndrias, tampão de isolamento um ou IB um, tampão de isolamento dois ou IB dois e tampão experimental ou eb.Consulte o protoc

mitochondrial-isolation-from-skeletal-muscle

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Métodos para biópsia de vasto lateral, a preparação de mitocôndrias purificada e profiling respirométrico são descritos. O uso de volume muscular pequeno torna esta técnica adequada para aplicações de pesquisa clínica.

Preparação e Avaliação respirométrico de mitocôndrias isoladas de tecido muscular esquelético Obtido por meio de agulha de biópsia percutânea

Aqui, apresentamos uma modificação de um método relatado anteriormente que permite o isolamento de mitocôndrias purificadas e de alta qualidade de quantidades menores de músculo esquelético de camundongo. Este procedimento resulta em mitocôndrias altamente acopladas que respiram com alta função durante ensaios respiratórios baseados em microplacas.

Isolamento de mitocôndrias de quantidades mínimas de Rato Músculo Esquelético para medições High Throughput Microplate respiratórias

Aqui, uma amostra de músculo quadríceps é retirada de um porco anestesiado e as mitocôndrias são isoladas por centrifugação diferencial. Em seguida, as frequências respiratórias dos complexos I, II e IV da cadeia respiratória mitocondrial são determinadas por meio de respirometria de alta resolução.

Isolamento de mitocôndrias intactas de Músculo Esquelético por centrifugação diferencial para medições Respirometria de alta resolução

Mitocôndrias são organelas metabólicas chave que exibem um alto nível de plasticidade fenotípica no músculo esquelético. A importação de proteínas do citosol é um caminho crítico para a biogênese organela, essencial para a expansão do ritúlume e a manutenção da função mitocondrial.  Portanto, a importação de proteínas serve como um barômetro da saúde celular.

Medição da Capacidade de Importação de Proteínas das Mitocôndrias Musculares Esqueléticas

Aqui, descrevemos um método detalhado para o isolamento das mitocôndrias do músculo esquelético do camundongo e a análise subsequente da respiração pela Taxa de Consumo de Oxigênio (OCR) usando assins respirométricos à base de microplacas. Este gasoduto pode ser aplicado para estudar os efeitos de múltiplas intervenções ambientais ou genéticas no metabolismo mitocondrial.

Isolamento das Mitocôndrias do Músculo Esquelético do Rato para Ensaios Respirométricos

Este protocolo descreve uma técnica para a análise de supercomplexos respiratórios quando apenas pequenas quantidades de amostras estão disponíveis.

Isolamento de mitocôndrias para análise de supercomplexos mitocondriais a partir de pequenas amostras de cultura de tecidos e células 

Estudos bioenergéticos e metabolômicos sobre mitocôndrias revelaram seu papel multifacetado em muitas doenças, mas os métodos de isolamento para essas organelas variam. O método detalhado aqui é capaz de purificar mitocôndrias de alta qualidade de várias fontes de tecido. A qualidade é determinada pelas taxas de controle respiratório e outras métricas avaliadas com respirometria de alta resolução.

Isolamento mitocondrial robusto de tecido cardíaco de roedores 

O micro-dissecados técnica de explantes é um método robusto e confiável para isolar proliferativa das células do músculo esquelético juvenil, adulto ou músculos embrionárias como fonte de células-tronco do músculo esquelético. Excepcionalmente, estas células têm sido clonal para produzir derivados do músculo esquelético linhas de células-tronco usado para in vivo o transplante.

Adultas e embrionárias Cultura Microexplant Músculo Esquelético e isolamento de células-tronco musculares

Método para a dissociação enzimática, rotulagem superfície e purificação por citometria de fluxo de fibro / adipogénicos e progenitores miogênica de músculo esquelético murino.

Purificação de Progenitores do músculo esquelético

Fluorescência baseada em Medição da loja operada entrada de cálcio em células vivas: a partir de células cancerosas cultivadas em fibra muscular esquelética

Aprenda a isolar mitocôndrias do músculo esquelético e medir a respiração mitocondrial por oxigrafia. Este método permite avaliar o consumo de oxigênio em diferentes estados respiratórios para estudos de metabolismo.

Isolamento mitocondrial do músculo esquelético

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