Name: Uso de um Sistema de Peso de suspensão para oclusão da artéria coronária em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-19T11:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Aprenda a induzir isquemia miocárdica em ratos utilizando um sistema de peso de suspensão para oclusão da artéria coronária. Este método permite estudar mecanismos cardioprotetores e precondicionamento isquêmico em modelos animais.

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Os estudos atuais são suportados pelo National Heart, Lung, and Blood Institute Grant R01-HL0921, R01-R01-DK083385 e HL098294 para HK Eltzschig, o 1K08HL102267-01 a T. Eckle e Fundação para a Educação Anestesia e Bolsas de Investigação para T. Eckle e HK Eltzschig, e da American Heart Association para Grant T. Eckle e Eltzschig HK e uma bolsa de pesquisa Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) para M. Koeppen. Agradecemos a Shelley Eltzschig para a obra de arte.

Observações gerais: Todas as operações devem ser realizadas em um microscópio de dissecação vertical (Olympus, SZX10 com Z-Axis Mensagem Crank com STU2 Fique StandBoom) e usando um coagulador cirúrgico. Ventilação é fundamental para o processo e, portanto, uma certa quantidade de tempo deve ser gasto na escolha do ventilador e otimizando a técnica de ventilação. Temperatura, pressão arterial e anestesia deve ser estável por toda parte. 1. Intubação anestesia e monitoramento <ol><li> Use camundongos C57BL / 6 que são pelo menos 10 semanas de idade. Induzir a anestesia com pentobarbital sódico na dose de um ip 70 mg / kg peso corporal manter a anestesia com aproximadamente 10 mg / kg / h de sódio pentobarbital. Seja cauteloso com overdose uma vez que este pode reduzir significativamente a pressão arterial. Re-dose de pentobarbital - mesmo depois de horas-pode levar a um aumento severo dos níveis plasmáticos. Com base em fortes evidências sobre isoflurano como composto cardioprotetor recomendamos o uso do "inerte" e bem estabelecidos pentobarbital em um modelo de isquemia miocárdica 46-56. </li><li> Camundongos colocar em uma mesa aquecida com temperatura controlada (RT, Effenberg, Munique, Alemanha) com uma sonda termômetro retal ligado ao controlador de retorno térmico para manter a temperatura corporal a 37 ° C. </li><li> Depois de ratos indução anestésica segura em posição supina, com as extremidades superiores e inferiores em anexo a tabela com uma fita e uma sutura presa aos tornozelos. Faça o mesmo para a cabeça, usando os dentes. A restrição suficiente é importante para uma intubação e cirurgia bem sucedida bem controlada. Antes da cirurgia, cobrir o mouse com óleo mineral para reduzir o risco de alergia cabelo mouse. </li><li> Expor a traquéia cirurgicamente e realizar uma intubação traqueal utilizando cânulas bluntpolyethylene (INSYTE 22g, Beckton Dickinson, EUA). Você terá que blunt a agulha para ser capaz de usá-lo como um estilete. </li><li> Puxe a língua para fora usando um par de fórceps e empurre delicadamente em um ângulo de 15 graus em direção ao corpo. Mesmo após a exposição da traquéia e usando um microscópio, isto pode exigir algum treinamento. Estar ciente de que um dano pequeno da traquéia pode levar à incapacidade de ventilar o animal ao longo da sutura. Assim, se você encontrar problemas das vias aéreas verificar a traquéia de pequenos buracos. </li><li> Confirmar o posicionamento correto através da visualização direta da cânula dentro da traquéia anteriormente expostos acima da carina. </li><li> Ligue o tubo a um ventilador. Recomendamos uma pressão técnica de ventilação controlada usando um C 900 Servo da Siemens (DRE Veterinária, EUA). Animais serão então ventilado com pressão inspiratória de pico de 10 mbar, frequência de 110 respirações / min e uma pressão positiva expiratória final de 3-5 mbar com uma FiO 2 = 0,4. Configurações pode precisar de alguns ajustes que podem ser alcançados mais facilmente, verificando os pulmões durante a cirurgia do tórax aberto. Certifique-se que os pulmões não são recolhidos ou overextended. Apesar do fato de que o C 900 Servo é construído como ventilador para os seres humanos, a sua utilização em um ambiente de ventilação pressão controlada excelentes trabalhos para a ventilação de camundongos. </li><li> Realizar a análise de gás de sangue para confirmar a troca gasosa normal (pressão parcial de oxigênio, PaO 2 de 115 ± 15 mmHg e pressão parcial de dióxido de carbono, paCO 2 de 38 ± 6 mmHg) após 4 a 6 horas de tempo de ventilação usando o i-STAT sistema (Abbott, EUA). </li><li> Monitor de freqüência cardíaca com ECG (por exemplo, Hewlett Packard, Böblingen, Alemanha). Certifique-se que a freqüência cardíaca não cai abaixo de 450. Se o rato se desenvolve bradicardia verificação da temperatura e da dose do anestésico / concentração. Xylacin / cetamina induz anestesia um coração coração de 250 / min e não é recomendada. </li><li> Aplique uma reposição de líquidos adequada. Uma infusão com solução salina 0,1 ml / hora através de um cateter arterial ou venosa deve ser realizada antes do início da isquemia. Além disso, uma solução salina em bolus de 500 mL pode ser dado ip antes da cirurgia. Thoractomy pode induzir uma queda na pressão sanguínea e pode exigir boli solução salina. Após a isquemia, uma taxa de perfusão até 1 ml / hora pode ser necessário para manter uma pressão arterial média acima de 60 mmHg e garantir uma reperfusão crítica suficiente para a coloração de infarto utilizando TTC. </li><li> Coloque uma artéria carótida (PI10, Tip OD (mm / "), cônicos&gt; 0,024 mm/.011") para a gravação contínua da pressão arterial. A artéria carótida serão expostos por meio de dissecção romba da musculatura paratraqueal. Após a exposição ainda mais cuidado e evitar de qualquer trauma tecidual (particular do nervo vago), um cateter é inserido dentro do vaso usando duas suturas e uma pinça pequena. Fixe o braço para o corpo antes de começar a dissecção da artéria. Isto irá expor um pedaço mais longo da artéria. Knot terminar a muito da parte proximal da artéria carótida. Anexar um maior aperto para o final da sutura paraobter tensão. Coloque outro sutura ao redor da artéria e dissecar a artéria até o fim distal. Aqui, colocar uma braçadeira de pequeno porte. Use uma tesoura para cortar micro de uma pequena abertura na diagonal dentro da artéria. Segure a abertura com uma pinça fina (Dumont, WPI) e avançar o cateter de tamanho apropriado com as mãos / fórceps. Faça um nó com o seu segundo e segura de sutura da artéria. Solte a braçadeira e avançar o cateter ainda mais. Fixe o cateter com vários nós e fita. </li></ol> 2. Técnica de oclusão da artéria coronária <ol><li> Dissecar a pele e expor a parede do tórax esquerdo, utilizando uma técnica de dissecção romba. </li><li> Corte dos músculos peitorais maiores e menores para expor a parede do tórax com um cautério. Ao puxar o peitoral maior, o de pulmão cai, assim, uma pinça a partir da unidade eletrocirúrgica podem ser inseridos, e, 1-3 mm acima do pulmão, uma linha horizontal cruzando os rasgos devem ser coagulado. </li><li> Usando uma tesoura embotado, corte a parede do tórax. Alfinetes de segurança modificado, onde a placa de captura é removida ea extremidade sem corte é dobrado, são então utilizados para manter o tórax aberto. </li><li> Para facilitar a colocação final da sutura, coagular e cortar a parede do tórax ao longo do diafragma para o lado inferior esquerdo do tórax. </li><li> Exposição do coração através da dissecção do pericárdio. Para evitar movimentos do diafragma remover e cortar o nervo frênico. </li><li> Use uma vara pequena de algodão molhado com uma pinça e converterá o coração para o lado direito. Identificar a artéria coronária esquerda (LCA) e certifique-se que os pulmões não estão muito inflacionados. Otimizar a abertura do tórax para ter uma fixação segura do coração quando colocar a sutura. Se a pressão arterial está muito baixa a identificação pode ser complicada. Boli adicionais de solução salina pode melhorar a identificação do LCA. A LCA é um vaso vermelho brilhante cruzando o coração na horizontal (em contraste com as veias de retorno). Às vezes, o LCA é mais vistos sem um microscópio. Não use também muita luz. Isso pode levar a reflexões sever tornando impossível a visualização. </li><li> Uma vez que o LCA é visualmente identificado, coloque um fio de náilon 8.0 (Prolene, Ethicon, Notiefies, EUA) em torno da LCA. Para efeitos de oclusão intermitente LCA, adotamos um modelo de cardiomiopatia crônica 42 usando um sistema de peso pendurado. </li><li> Passe o fio através de um pequeno pedaço de tubo de plástico (PE-10 tubos) com bordas sem corte e anexar dois pequenos pesos (1g, por exemplo, utilização de tubos Eppendorf cheio de água) em cada extremidade. Com os pesos livremente pairando sobre uma haste, a LCA deve ser imediatamente ocluído. Além disso, quando o peso é aliviado, LCA oclusão é terminada de uma vez. Sucesso LCA oclusão deve ser confirmado por uma mudança de cor imediata do navio da luz vermelho ao violeta escuro, mudança de coloração do miocárdio fornecido pelo navio (de vermelho para branco) ea presença de ST-elevações da ECG. Durante a reperfusão, as mudanças de cor desaparecer instantaneamente. Manter o coração molhado com a 37 ° C, salina peça, embebido de algodão absorvente todo (ver também Figura 1). </li><li> Escolheu o seu tempo de isquemia de acordo com seu interesse primário. Na verdade, para estudos dos efeitos cardioprotetores da IP, o ideal seria usar um tempo de isquemia associada a um infarto em tamanhos de aproximadamente 30 a 40% da AAR. Assim, seria possível demonstrar alterações em ambas as direções, tamanhos menores, com infarto, por exemplo IP cardíaca ou infarto tamanhos maiores com uma terapêutica experimental ou uma deleção do gene específico. Além disso, camundongos com um tamanho do infarto de menos de 50% normalmente sobreviver à experiência, ao passo que infarto tamanhos de 60 a 80% não são muitas vezes sobreviveram e os animais morrem antes do tempo de reperfusão é completa. Usando o nosso modelo de 10 minutos de isquemia do miocárdio seguido de 2 horas de reperfusão resulta em um tamanho do infarto de 3,5 ± 1,3% da AAR. Em contraste, um tempo de isquemia de 60 minutos resulta em um tamanho do infarto média de 42 ± 5,2% da AAR (p &lt;0,01) 39. Assim, consideramos a 60 minutos de isquemia como ideal para estudar mudanças em ambas as direções. No entanto, você pode ter que ajustar o tempo de isquemia em ratos gene-alvo com um fenótipo sever. </li><li> Escolheu o momento certo de reperfusão. O tempo de reperfusão é extremamente importante para a coloração TTC. O corante incolor é reduzida a um precipitado vermelho-tijolo-colorido por desidrogenases na presença do NADH co-enzima. Células que morrem perdem a capacidade de reter NADH e, portanto, são delineadas como áreas pálidas no miocárdio viável manchada de vermelho. Infarto delineamento tamanho por TTC exige que NADH foi lavada completamente da área de necrose. No entanto, se reperfusão não é suficientemente longo, delimitação do tamanho do infarto pela coloração TTC pode resultar em uma subestimação do tamanho do infarto real 43. Em nossas mãos, depois de um tempo de isquemia de 60 min, a medição do tamanho do infarto aumentou de 11,5 ± 4,5% depois de 30 minutos para 42,2 ± 5,1%após 120 minutos. Nenhum aumento no tamanho do infarto pode ser detectada com maior tempo de reperfusão (240 minutos) 39. Assim, recomendamos um período de duas horas de reperfusão que parece também razoável no contexto de determination.If enzimas cardíacas você considera isquemia pré-condicionamento, recomendamos 4 ciclos de IP (5 min de isquemia, reperfusão 5 min), seguido de um tempo de isquemia de 60 min e um tempo de 2 horas de reperfusão. Sob essas condições, IP foi associado com uma redução de 3,2 vezes do tamanho do infarto de 42,2 ± 5,1% para 13,3 ± 3,3% da AAR 39. No entanto, devido ao sistema de peso enforcamento, diferentes regimentos de pré-condicionamento poderia ser facilmente aplicada. </li></ol> 3. Determinação da Área At Risk (AAR) e tamanho do infarto Após a indução de um infarto do miocárdio (com ou sem IP), a área é perfundido pela LCA (área de risco, AAR) e do tamanho do infarto em si será determinada utilizando uma técnica de coloração. Posteriormente, infarto será então calculada como porcentagem de infarto do miocárdio em comparação com o AAR. Para fazer isso, uma técnica de coloração descrito anteriormente dupla com cloreto de azul e trifeniltetrazólio Evan (TTC) é usada 44. <ol><li> Determinar a AAR pela injeção retrógrada de 1% de corante azul de Evan para a aorta, enquanto o LCA é ocluído. Alternativamente, se um cateter carotis está no lugar, use esta rota para Evans injeção de azul. Azul de Evans vai manchar todo azul do tecido do miocárdio, exceto a AAR. É fundamental para esta etapa para evitar bolhas de ar dentro do cateter, como seriam injetados na circulação coronariana e evitar manchas azul de Evan. Antes da coloração azul Evans você pode querer coletar sangue para dosagem de enzimas cardíacas. Além disso, a remoção de sangue através da injeção de 5 ml de soro fisiológico através de um cateter aórtica ou carotis é recomendado. </li><li> O coração do consumo e lave em soro fisiológico gelado a 0,9% </li><li> Incorporar em agarose 2%. Não use agarose quente desde que isso vai impedir a coloração bem sucedida. </li><li> Após 30 minutos a 4 ° C (ou 15 minutos -20 ° C), corte o coração em fatias de 1 mm usando uma matriz de coração ou micrótomo. Se você colocar o coração no freezer evitar o congelamento seco, que vai levar à não corações manchados. </li><li> Incubar as fatias com TTC 1% a 37 ° C por 10 min usando a 15 ml tampa azul em banho-maria. Isso permitirá que a área infartada a ser demarcada como área branca, enquanto que as manchas vermelhas tecido viável. </li><li> Fixar as fatias corados com fomaldehyde 10% durante a noite. Ao fazer isso, a área infartada é melhor contraste melhoria da qualidade de imagens. </li><li> Determinar a área de risco (AAR) e do tamanho do infarto por meio de planimetria usando o software NIH Imagem 1,0 45. </li><li> Calcular o percentual de infarto do miocárdio a partir da área em risco. </li></ol> 4. Medição de enzimas cardíacas Devido a limitações associadas a coloração TTC recomendamos leitura como adicional para a gravidade do infarto do miocárdio a determinação de troponina cardíaca I (cTnI) níveis no soro de camundongos. O sangue será obtido a partir da veia portal e os níveis séricos cTnI são, então, determinada com um ensaio de cTnI quantitativa rápida (Life Diagnostics, Inc., West Chester, PA, EUA). 5. Resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/2526/2526fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. (A) Modelo de IP cardíaca utilizando um sistema de suspensão de peso de oclusão coronária. Esta técnica não exige um nó para a oclusão coronária. (B, C) de instalação cirúrgica. (D) Imagem de um coração de camundongos com a artéria coronária esquerda (LCA, setas) após a oclusão. Identificação visual do LCA é necessário para ligadura e pré-condicionamento isquêmico em ratos. Uma sutura de nylon 8.0 é colocado ao redor do 1-2 mm LCA debaixo da orelha esquerda. A sutura é enfiada através de um pequeno tubo de plástico (*). O final de cada sutura é anexado a um pequeno peso (1g) ea sutura é colocada sobre as hastes dos dois lados. (E) Determinação da AAR LCA após oclusão e injeção retrógrada de corante azul de Evan para a aorta. A AAR permanece imaculada, enquanto o resto do miocárdio é azul. Após a incubação da AAR tecido com TTC, a área de infarto branco manchado, enquanto o vermelho manchado viável tecido.

Não há conflitos de interesse declarados.

O presente estudo descreve uma nova técnica de realizar IP em um modelo murino intacta usando um sistema de suspensão de peso e evitando assim a oclusão da artéria coronária por um nó. De fato, este estudo demonstra tamanhos infarto altamente reprodutível e proteção cardíaca por IP, minimizando assim a variabilidade associada com nó modelos baseados em oclusão coronária. Investigadores que consideram estudar cardioproteção por IP em camundongos podem beneficiar deste modelo.

<table><tbody><tr><td>Pentobarbital de Sódio (Fatal Plus)</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td>V.P.L. 9372</td><td>4 mg/mL em solução salina</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17779 Fluka</td><td>1,5 % em PBS</td></tr><tr><td>Azul de Evans</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>10 g em 1 L de PBS</td></tr><tr><td>Insyte 22 G</td><td>BD Biosciences</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 4,0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>Sutura Prolene 8,0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>M8739</td><td>reutilizável</td></tr><tr><td>Matriz Cardíaca</td><td>Zivic Instruments</td><td># HSMS001</td><td></td></tr><tr><td>Siemens 900 C</td><td>DRE Veterinary</td><td># 336</td><td>recondicionado</td></tr><tr><td>microscópio estereoscópico (SZX10)</td><td>Olympus Corporation</td><td>n/a</td><td>considerar distância de trabalho generosa</td></tr><tr><td>Mesa de aquecimento</td><td>Rt, Effenberger, Alemanha</td><td>n/a</td><td>único e exclusivo fornecedor</td></tr><tr><td>Dispositivo de pressão sanguínea</td><td>Cyber Sense, Inc</td><td>BPM02</td><td></td></tr><tr><td>I STAT</td><td>Abbott Laboratories</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

uso de um sistema de peso de suspensão para oclusão da artéria coronária em ratos

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Estudos murino de lesão aguda são uma área de intensa investigação, como camundongos knockout para os genes diferentes estão se tornando cada vez mais disponíveis 1-38. Cardioproteção por pré-condicionamento isquêmico (PI) continua sendo uma área de intensa investigação. Para melhor elucidar a sua base molecular, o uso de estudos com ratos knockout é particularmente importante 7, 14, 30, 39. Apesar do fato de que estudos anteriores já realizados com sucesso isquemia cardíaca e reperfusão em ratos, este modelo é tecnicamente muito difícil. Particularmente, a identificação visual da artéria coronária, a colocação da sutura ao redor do navio e oclusão coronária por amarrar a embarcação com um nó suportado é tecnicamente difícil. Além disso, re-abertura do nó de reperfusão intermitente da artéria coronária durante IP sem causar trauma cirúrgico acrescenta desafio adicional. Além disso, se o nó não está amarrado forte reperfusão, o suficiente acidental devido a oclusão imperfeita da coronária podem afetar os resultados. Na verdade, isso pode facilmente ocorrer devido ao movimento do batimento cardíaco. Com base em potenciais problemas associados ao uso de um sistema de oclusão coronária atado, adotamos um modelo previamente publicados de cardiomiopatia crônica baseada em um sistema de peso pendurado por oclusão da artéria coronária intermitente durante 39 IP. Na verdade, a oclusão da artéria coronária pode assim ser alcançado sem a necessidade de ocluir a coronária por um nó. Além disso, a reperfusão do vaso pode ser facilmente conseguida através do apoio dos pesos que são pendurados em uma localização remota a partir de tecidos cardíacos. Nós testamos este sistema de forma sistemática, incluindo variação de isquemia e reperfusão vezes, regimentos pré-condicionamento, a temperatura do corpo e base genética 39. Além de infarto coloração, testamos troponina I (cTnI) como um marcador de infarto do miocárdio neste modelo. Na verdade, os níveis plasmáticos de cTnI correlacionados com tamanhos de infarto (R2 = 0,8). Finalmente, nós poderíamos mostrar em vários estudos que esta técnica produz tamanhos infarto altamente reprodutível durante IP murino e infarto do miocárdio 6, 8, 30, 40, 41. Portanto, essa técnica pode ser útil para pesquisadores que buscam mecanismos moleculares envolvidos na cardioproteção por IP usando uma abordagem genética em camundongos com deleção do gene alvo. Mais estudos sobre IP cardíaca utilizando camundongos transgênicos podem considerar esta técnica.

Um modelo murino de isquemia miocárdica e pré-condicionamento isquêmico é uma importante ferramenta de estudo de mecanismos cardioprotetores<em&gt; In vivo</em&gt;. Aqui, nós relatamos uma aplicáveis ​​fácil<em&gt; In situ</em&gt; Modelo para IP cardíaca utilizando um sistema de suspensão de peso para a oclusão da artéria coronária.

Uso de um Sistema de Peso de suspensão para oclusão da artéria coronária em ratos

Estudos murinos de lesão aguda são uma área de investigação intensa, visto que camundongos knockout para diferentes genes estão se tornando cada vez mais disponíveis 1-38. ...

O objetivo geral deste procedimento é induzir isquemia miocárdica no coração de camundongo, com ou sem pré-condicionamento isquêmico. Isso é realizado primeiramente utilizando uma técnica otimizada de anestesia, posicionamento, ventilação e reposição hídrica. O segundo passo do procedimento consiste em realizar uma toracotomia lateral para facilitar o acesso à artéria coronária.O terceiro passo é posicionar um fio cirúrgico ultrafino sob a artéria e aplicar um sistema de peso suspenso para induzir uma oclusão. Por fim, o corante azul de Evans é injetado na artéria carótida e a coloração com TTC é realizada no coração para visualizar o tecido infartado. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram a extensão do miocárdio danificado em animais geneticamente modificados ou tratados farmacologicamente.Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à complexidade na identificação da artéria coronária e na anestesia, ventilação e reposição hídrica. Para começar, posicione um camundongo anestesiado em posição supina sobre uma mesa aquecida com controle de temperatura, passe material de sutura ao redor de cada membro e, em seguida, fixe as suturas à mesa. Em seguida, fixe a cabeça no lugar passando uma sutura sob os dentes superiores.Movimentos de roedores durante a contenção. O uso da sutura indica profundidade inadequada de anestesia para o procedimento cirúrgico. Se observado, o roedor deve receber uma nova dose equivalente a um terço a um quarto da dose inicial de pentobarbital e a anestesia deve ser confirmada por meio do teste de preensão do dedo do pé.Uma vez preparado, o camundongo pode ser coberto com óleo mineral para reduzir a exposição a alérgenos provenientes do pelo. Administre um bolo salino de 500 microlitros e insira uma sonda retal conectada a um controlador térmico de realimentação para garantir que a temperatura corporal permaneça em 37 graus Celsius. Para expor a traqueia, faça uma incisão ao longo do pescoço e realize dissecação romba.Disseque o músculo circundante e o tecido conjuntivo. Segure a língua com pinça e insira suavemente uma cânula romba de polietileno em um ângulo de 15 graus em direção ao corpo. Confirme a colocação correta do tubo por meio da visualização direta da cânula dentro da traqueia previamente exposta.Acima da Corina. Conecte o tubo a um ventilador servo 900 C. Ajuste o pico de pressão inspiratória em 10 milibares com uma frequência de 110 respirações por minuto e uma pressão positiva ao final da expiração de três a cinco milibares com uma fração de oxigênio inspirado igual a 0,4.Uma vez que o animal esteja conectado com sucesso ao ventilador, um cateter é inserido na artéria carótida para medir a pressão sanguínea e a frequência cardíaca. Um segmento mais longo da artéria será exposto se o braço for fixado primeiramente ao lado do corpo. Comece realizando uma dissecação romba dos músculos paratraqueais para expor a artéria carótida; após isolá-la, faça uma sutura na extremidade proximal da artéria e fixe-a com um clamp ou fita.Coloque uma segunda sutura a cerca de 0,5 centímetros de distância da primeira e dê o nó, mas não aperte a sutura ao redor da artéria. Disseque a artéria até a extremidade mais distal e coloque um pequeno clamp para prevenir perda sanguínea. Use tesoura microcirúrgica para fazer uma pequena abertura diagonal na artéria abaixo da primeira sutura.Segure a abertura com pin&ccedil;as finas enquanto insere o cateter. Avance o cateter. Passe o segundo ponto e aperte o n&oacute; para fix&aacute;-lo no lugar.Em seguida, solte o grampo e avance o cateter mais profundamente. Fixe o cateter com vários nós e fita adesiva. Uma vez posicionado o cateter, infunda soro fisiológico à taxa de 0,1 mililitro por hora e conecte-o ao dispositivo de medição da pressão arterial.Por fim, fixe grampos nas extremidades para monitorar a frequência cardíaca. Agora que os preparativos cirúrgicos estão concluídos, faça uma incisão sobre o tórax e exponha os músculos peitorais. Corte os músculos peitorais para que possam ser puxados verticalmente para cima.Use um cordão para criar uma linha horizontal na parede torácica onde ocorre a incisão ao utilizar o músculo cordão. As contrações são reações normais à corrente aplicada. Esses movimentos devem ser diferenciados de uma profundidade inadequada de anestesia mediante pinçamento dos dedos dos pés com os dedos ou com pinças.Mantenha o músculo levantado antes de cortar para garantir que os pulmões desçam e saiam do caminho. Corte a parede do tórax com tesoura romba e use agulhas de segurança modificadas para manter o tórax aberto. Em seguida, corte o tórax ao longo do diafragma, afastando-se da cavidade torácica.Primeiro, trace a linha de corte prevista com um cotonete, e então faça um corte vertical ao longo do diafragma em direção ao lado inferior esquerdo do tórax. Disseque o pericárdio para expor o coração e corte o nervo frênico. Para evitar movimentos do diafragma, use um aplicador de algodão umedecido para virar o coração em direção ao lado direito.Identifique a artéria coronária esquerda ou ACE e otimize a abertura do tórax. Isso garante uma fixação segura do coração. Ao posicionar o ponto, mantenha o coração úmido com um pedaço de algodão umedecido com solução salina a 37 graus Celsius durante todo o procedimento. Após identificação, posicione um ponto de náilon sob a ACE.Prepare o sistema de peso suspenso passando ambas as extremidades da sutura por um pequeno pedaço de tubo plástico com bordas rombudas. Afixe um pequeno peso a cada extremidade da sutura e pendure sobre uma haste para criar tensão, com os pesos pendendo livremente sobre a haste. A artéria cerebral anterior (LCA) deve ser imediatamente ocluída. Com sucesso.A oclusão da artéria circunflexa esquerda (LCA) pode ser confirmada por uma mudança imediata da cor do vaso de vermelho claro para violeta escuro e do miocárdio suprido pelo vaso, que passa de vermelho brilhante para branco. Encerre a oclusão da LCA em um tempo predeterminado, aliviando a pressão dos pesos. A reperfusão bem-sucedida é evidente quando a cor retorna, permitindo determinar a área em risco.Ou injete corante azul de Evans 1% na aorta. Enquanto a artéria coronária anterior esquerda (LCA) estiver ocluída, o azul de Evans corará todo o tecido miocárdico de azul, exceto a a r.Para análise adicional da área de infarto, excise o coração e lave-o em solução salina a 0,9% gelada. Incorpore o coração em 2% de aeros e deixe a quatro graus Celsius por 30 minutos. Corte o coração em fatias com espessura de um milímetro.Usando uma matriz cardíaca ou microtomo, incubar as fatias com TTC 1% a 37 graus Celsius por 10 minutos. Utilizando um tubo de 15 mililitros com tampa azul em banho-maria, a área infartada será branca, enquanto os tecidos viáveis ficam corados de vermelho após o desenvolvimento. Essa técnica abriu caminho para pesquisadores na área de isquemia miocárdica explorarem efeitos cardioprotetores utilizando modelos genéticos e farmacológicos.

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Um modelo murino precisa de lesão renal aguda (IRA) devido à isquemia é uma ferramenta importante para investigar lesão renal aguda e, eventualmente, encontrar ferramentas terapêuticas para tratar a lesão renal. O sistema de suspensão de peso oferece uma ferramenta para a oclusão da artéria renal imediata e confiável e reperfusão sem causar congestão renal.

Uso de um sistema de suspensão de peso para oclusão da artéria renal isolada

Nós estabelecemos um novo modelo murino de um sistema de peso pendurado por isquemia hepática. Esta técnica pode ser útil para futuras investigações de isquemia em modelos murinos hepáticas.

A utilização de uma suspensão do sistema de peso para isquemia hepática em ratos

Numerosas manipulações genéticas e / ou injeções intramiocárdica de genes, proteínas, células e / ou biomateriais são sobrepostos sobre a dimensão do tempo em estudos de lesão de isquemia / reperfusão aguda e crônica em camundongos remodelação. Este vídeo ilustra os procedimentos de microcirurgia para isquemia / reperfusão, ligadura da artéria coronária permanente, e estudos de injeção intramiocárdica.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.

Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para gerar um modelo de infarto do miocárdio em camundongos ligando permanentemente a artéria coronária descendente anterior.

Gerando Modelo Murino de Infarto do Miocárdio: Um Procedimento Cirúrgico para Ligadura Permanente da Artéria Coronária Descendente Anterior em Modelo de Camundongo

A insuficiência cardíaca é a principal causa de hospitalização e uma das principais causas de mortalidade. Um modelo de ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior em camundongos é aplicado para investigar o remodelamento ventricular e a disfunção cardíaca pós-infarto do miocárdio. A técnica de medidas hemodinâmicas invasivas em camundongos é apresentada.

A ligação permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda em Ratos: Um Modelo de Remodelação pós-infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca

Minimamente invasiva constrição aórtica transversal (MTAC) conserva o essencial da constrição aórtica transversal regulares (TAC), eliminando o uso de um ventilador com intubação traqueal. Ele revela-se um método altamente desejável para os estudos de alto rendimento sobre a sobrecarga do ventrículo esquerdo, particularmente em estudos translacionais.

Minimamente Invasiva transversal aórtica constrição em Ratos

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Apresenta-se aqui um procedimento cirúrgico para ligadura permanente da artéria coronária esquerda em camundongos. Este modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

Aprenda a induzir isquemia miocárdica em ratos utilizando um sistema de peso de suspensão para oclusão da artéria coronária. Este método permite estudar mecanismos cardioprotetores e precondicionamento isquêmico em modelos animais.

Uso de um Sistema de Peso de suspensão para oclusão da artéria coronária em ratos

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