Name: Myo-mecânico Análise do músculo esquelético isolado (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-22T18:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Aprenda a analisar força e fadiga do músculo esquelético isolado em camundongos usando miografia. Este método quantitativo avalia intervenções terapêuticas para doenças musculares em modelos pré-clínicos.

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Este trabalho foi apoiado por um Serviço de Saúde Pública Grant (HL086513) de NHLBI a PEO, e uma bolsa de pesquisa abrangente do Instituto de Medicina Regenerativa da Califórnia (RC1-00104), um Serviço de Saúde Pública Grant (HL085377) de NHLBI, e um presente da Fundação Pollin para HSB SC foi apoiado por uma California Institute for Bridges Medicina Regenerativa de Stem Prêmio Célula de Investigação (TB1-01194) para San Francisco State University.

O protocolo é realizada com a aprovação do Animal Care UCSF Institucional e Comitê de Uso (IACUC). 1. Dissecção da Longus do rato Digitorum Extensor (EDL) Músculo <ol><li> Executar todos os procedimentos animal, em conformidade com as diretrizes institucionais. </li><li> Eutanásia de animais com 200 mg / kg deslocamento pentobarbital / cervical intraperitoneal apenas antes da colheita do músculo 10. A dissecção deve ser bem praticada para que o músculo pode ser colhido e montada no transdutor de tensão dentro de 15 minutos de eutanásia. </li><li> Organizar supina carcaça na bandeja de dissecação e perna pino para bandeja. </li><li> Sob o microscópio de dissecação, aberta pele, fáscia cuidadosamente aberto (Fig.1a), e casca tibial do tornozelo para cima para expor EDL (Fig.1b). Use gotas de solução de Ringer com lactato para manter o músculo úmido e buffer durante a colheita. </li><li> Remover EDL, preservando como tendão tanto quanto possível em cada extremidade, e colocado em uma placa de Petri contendo solução de Ringer com lactato. Laço de sutura para cada um dos tendões do músculo (Figura 1C). É essencial que as fibras musculares não ser tocado ou perturbado durante a dissecção. </li></ol> 2. Montagem da EDL do rato na Faixa de Myograph Muscle <ol><li> Para esses estudos, um banho de tecido é necessário que prende o músculo ao mesmo tempo permitindo que ele se banhar em soro fisiológico à temperatura constante com oxigenação contínua. O banho é acoplado a um transdutor de força para a medição da tensão muscular. Nós empregamos um sistema integrado de banho myograph muscular tira do dinamarquês Myo Tecnologia (DMT Modelo 820MS) para esta finalidade. Além disso, um estimulador de pulsos elétricos quadrados (Modelo Grass S48) e dados da plataforma de aquisição (ADInstruments PowerLab Sistema de aquisição de dados e software LabChart) são necessários para obter, registrar e analisar mio-mecânica respostas, respectivamente. A 820MS DMT tem eletrodos de platina integrado a tampa do compartimento que estão posicionados em ambos os lados do músculo, na porção média da faixa de músculo. Myographs outras podem necessitar de cuidados específicos para a colocação do eletrodo. </li><li> Preencha banho myograph com 5 mL de solução Krebs Henseleit 11. Quente a 25 ° C. Bolha O 2 / CO 2 (95% / 5%) através de banho por 15 minutos antes do uso. </li><li> Use suturas para estender EDL entre pinças de myograph e segura os tendões do músculo EDL (Fig.1D, E) entre as pinças. Tenha cuidado para não prender o próprio músculo. </li><li> Manter myograph banho a 25 ° C. </li></ol> 3. Myo-mecânico Análise A. tensão Twitch <ol><li> Definir o comprimento inicial no banho para que não haja flacidez muscular. </li><li> Determine estímulo máximo (duração 0,5 ms), ajustando a tensão, a fim de obter a tensão máxima contração muscular, em seguida, definir estímulo de 20% acima da máxima (para alcançar estímulo supramáxima). Em nossos estudos, o estímulo supramáximo é geralmente obtida em uma saída de 40 volts. </li><li> Verifique a saída do estimulador usando um osciloscópio. </li><li> Determinar o comprimento ideal gradualmente alongamento do músculo até que não haja aumento de tensões twitch. </li><li> Permitir muscular para equilibrar por 3 min. </li><li> Oferecer estímulo quadrados supramáximo (0,5 ms) no comprimento ideal usando grama S44 estimulador eletrônico e de saída de gravação. </li><li> Record: curva de tensão twitch (P t vs tempo; Fig.2A). </li></ol> B. Tétano tensão <ol><li> Permitir muscular para descansar por 3 minutos. </li><li> Aplicar um trem de estímulos supramáximos para 300msec a 150 Hz no comprimento ideal usando grama S44 estimulador eletrônico e de saída de gravação. </li><li> Record: tétano curva tensão (P o tempo vs; Fig.2B). </li></ol> C. Força-frequência <ol><li> Permitir muscular para descansar por 3 minutos. </li><li> Força-freqüência: aplicar trens de estímulos supramáximos aos 30, 60, 100, 140 e 160 Hz, com 3 minutos de descanso entre cada estímulo (Fig. 3). Alternativamente, os trens podem ser aplicadas 15, 25, 35, 45, 55, 65, 75, 100, 140 e 160 Hz para uma melhor resolução em freqüências mais baixas, onde a força muda substancialmente. </li><li> Parcela: relação força-frequência (% máxima força freqüência de estimulação vs). </li></ol> D. Fadiga <ol><li> Aplicar trem de tetani curto: 60 Hz para 300 ms (ou frequência ajustada para produzir 50% do pico de força), a cada 3 segundos por 10 minutos. Por 10 minutos, a força tetânica deve recusar-se a um nível de platô de ~ 15% do valor inicial (Fig.4). </li><li> Parcela: a fadiga de baixa freqüência (% vs tempo máximo vigor). </li></ol> E. coleta de dados adicionais no final do protocolo <ol><li> Antes de desmontar o músculo do myograph, defina o muscle no tamanho ideal, conforme determinado na etapa III.A.4 e medir seu diâmetro usando uma ocular no microscópio ou com pinças. Calcular área transversal (M 2). </li><li> Medida da massa muscular (mg), removendo suturas e pesando muscular. </li><li> Pesar do mouse para avaliar a massa corporal (gm). </li></ol> 4. Cálculos <ol><li> Relação músculo: massa corporal = massa muscular / massa corporal </li><li> Tensão Twitch, P t (mN) = tensão máxima gerada durante a contração </li><li> Tensão twitch específico (N / cm 2) = twitch tensão (MN) / área da seção transversal (M 2) x 10 5 N / M mN • 2 cm / 2 </li><li> Tempo para o pico de tensão (ms) = tempo do início da contração de tensão máxima </li><li> Tempo de relaxamento (ms) = tempo de pico de tensão para 50% do pico de tensão </li><li> Tetânica tensão, P O (MN) = tensão máxima gerada durante o tétano </li><li> Tensão tetânica específico (N / cm 2) = tetânica tensão (MN) / área da seção transversal (M 2) x 10 5 N / M mN • 2 cm / 2 </li><li> Taxa máxima de aumento de tétano (N / s) = taxa máxima de aumento da tensão durante a ascensão tensão no tétano, ou seja, a inclinação máxima da curva de tensão tetânica (ou, dP O / dt) </li><li> Metade de relaxamento de tensão tetânica (ms) = tempo da cessação da estimulação a 50% da tensão no término da estimulação </li><li> Twitch tensão-to-tetânica relação de tensão, P t / P O = máxima contração tensão tetânica tensão / máximo </li><li> Índice de fadiga = relação de tensão após dois minutos de fadiga de baixa freqüência para tensão isométrica máxima </li></ol> 5. Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/2582/2582fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Dissecção do músculo EDL. A exposição, de hindlimb muscles.TA, tibial anterior. B, Exposição de EDL muscular (extensor longo dos dedos). C, Anexo de sutura para tendões EDL. D, banho Tension transdutor (vista do lado). E, EDL montados em banho (vista de cima). O músculo em forma incompleta imerso no buffer para fins ilustrativos, na prática, o músculo deve ser completamente imerso para evitar que sequem. <img src="/files/ftp_upload/2582/2582fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Exemplo de curvas de tensão. Um exemplo, da curva de contração tensão ilustrando a tensão máxima contração (P t), tempo de contração (TC) e tempo de relaxamento (HRT). Bar, 1s. B, Exemplo de curva de tensão tetânica mostrando a tensão tetânica máxima (P o) e meia-relaxamento da tensão tetânica (HRTT). Bar, 1s. <img src="/files/ftp_upload/2582/2582fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Exemplo de força de análise de frequências de relacionamento. A tensão, gerada por freqüências de estímulo incremental. B, Exemplo de trem de pulsos em 30MHz. Bar, 80ms. C, Exemplo de trem de pulsos em 140MHz. Bar, 80ms. D, Exemplo de força-freqüência curva de derivados de dados mostrados na A. A forma da curva força-frequência é característica da força muscular, e pode ser comparado entre os músculos de animais diferentes. <img src="/files/ftp_upload/2582/2582fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Exemplo de análise de fadiga de baixa freqüência. A tensões, decrescente gerados ao longo do período de stimulation.Examples baixa freqüência de trens de pulso em pontos de tempo indicado (B, C, D) são apresentados abaixo. E, Exemplo de curva de baixa freqüência fadiga derivada de dados mostrado na A. A forma da curva de fadiga de baixa freqüência é característica de força muscular, e pode ser comparado entre os músculos de animais diferentes.

<ol><li>Harcourt, L. J., Schertzer, J. D., Ryall, J. G., Lynch, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+dose+formoterol+administration+improves+muscle+function+in+dystrophic+mdx+mice+without+increasing+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Low dose formoterol administration improves muscle function in dystrophic mdx mice without increasing fatigue.</a> Neuromuscul Disord. 17, 47-55 (2007).</li>
<li>Messina, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+overexpression+via+adeno-associated+virus+gene+transfer+promotes+skeletal+muscle+regeneration+and+enhances+muscle+function+in+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">VEGF overexpression via adeno-associated virus gene transfer promotes skeletal muscle regeneration and enhances muscle function in mdx mice.</a> FASEB J. 21, 3737-3746 (2007).</li>
<li>Danieli-Betto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphingosine+1-phosphate+protects+mouse+extensor+digitorum+longus+skeletal+muscle+during+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sphingosine 1-phosphate protects mouse extensor digitorum longus skeletal muscle during fatigue.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 288, C1367-C1373 (2005).</li>
<li>MacIntosh, B. R., Willis, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force-frequency+relationship+and+potentiation+in+mammalian+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Force-frequency relationship and potentiation in mammalian skeletal muscle.</a> J Appl Physiol. 88, 2088-2096 (2000).</li>
<li>Hayes, A., Williams, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+clenbuterol-treated+mdx+muscle+are+enhanced+by+low-intensity+swimming%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of clenbuterol-treated mdx muscle are enhanced by low-intensity swimming.</a> J Appl Physiol. 82, 435-439 (1997).</li>
<li>Coulton, G. R., Curtin, N. A., Morgan, J. E., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mdx+mouse+skeletal+muscle+myopathy%3A+II.+Contractile+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathol+Appl+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The mdx mouse skeletal muscle myopathy: II. Contractile properties.</a> Neuropathol Appl Neurobiol. 14, 299-314 (1988).</li>
<li>Danieli-Betto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+alpha-sarcoglycan+differently+affects+fast-+and+slow-twitch+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Deficiency of alpha-sarcoglycan differently affects fast- and slow-twitch skeletal muscles.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 289, R1328-R1337 (2005).</li>
<li>Chan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+for+speed%3A+contractile+properties+of+isolated+whole+EDL+muscle+from+an+alpha-actinin-3+knockout+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">A gene for speed: contractile properties of isolated whole EDL muscle from an alpha-actinin-3 knockout mouse.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 295, C897-C904 (2008).</li>
<li>Personius, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grip+force%2C+EDL+contractile+properties%2C+and+voluntary+wheel+running+after+postdevelopmental+myostatin+depletion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl%22%5BJournal%5D)">Grip force, EDL contractile properties, and voluntary wheel running after postdevelopmental myostatin depletion in mice.</a> J Appl. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Donovan, J., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Euthanasia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Euthanasia.</a> Curr Protoc Immunol. Chap 1, (2006).</li>
<li>Beekley, M. D., Wetzel, P., Kubis, P., Gros, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+skeletal+muscle+fibre+bundles+from+mice+deficient+in+carbonic+anhydrase+II%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of skeletal muscle fibre bundles from mice deficient in carbonic anhydrase II.</a> Pflugers Arch. 452, 453-463 (2006).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Descrevemos uma abordagem detalhada para avaliar mio-mecânicas no músculo explantado hindlimb do mouse. A EDL, enquanto mais difícil de dissecar por causa de sua posição posterior atrás do músculo tibial anterior, é mais fácil de avaliar que o tibial anterior devido à sua proeminente anexos tendinosa ao tornozelo e joelho. Esses tendões facilitar a montagem na myograph strip muscular. Em contraste, a mais facilmente acessada tibial anterior tem um anexo, ampla quase atendinous na articulação do joelho, tornando-se extremamente difícil tanto para dissecar, sem comprometer o músculo, e montar com segurança no myograph. Destacamos ainda que rapidamente a montagem do músculo em um banho de oxigenada em solução fisiológica e temperatura é essencial para preservar as propriedades mecânicas do músculo. Descobrimos que podemos repetir esta análise para até 30 minutos sem mudanças significativas na resposta do músculo sob essas condições. Finalmente, é essencial que as fibras musculares não ser tocado durante a dissecção e processos de montagem, pois isso pode ter efeitos adversos sobre a função muscular, e resultam em subestimação de mio-mecânico força. Seguindo estes procedimentos, esta análise fornece uma abordagem robusta quantitativa para avaliar os efeitos da modificação genética na função muscular 6,7,8,9, bem como a comparação entre intervenções terapêuticas em modelos do rato da doença muscular 1,2,3,5 .

Soluções e Mídia Solução de Ringer com lactato <ul><li> 100 mM NaCl </li><li> 30 mM CH3CH (OH) COONa (lactato de sódio) </li><li> 4 mM KCl </li><li> 1 mM CaCl 2 2H 2 O (cloreto de cálcio dihidratado) <ul><li> ajustar o pH a 6,75 </li></ul></li></ul> Krebs Henseleit solução <ul><li> 118 mM NaCl </li><li> 4,7 mM KCl </li><li> 1,25 mM CaCl 2 </li><li> 1,2 mM MgCl 2 </li><li> 1,2 mM KH 2 PO 4 </li><li> 25 mM NaHCO 3 </li><li> 11 mM de glicose <ul><li> ajustar o pH para 7,2-7,4 por equilibrar com O 2 / CO 2 (95% / 5%) de gás </li></ul></li></ul> Pentobarbital <ul><li> 5 mg / mL solução de trabalho em água estéril </li></ul>

myo-mecânico análise do músculo esquelético isolado

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

Para avaliar os efeitos in vivo de intervenções terapêuticas para o tratamento da doença muscular 1,2,3, métodos quantitativos são necessários a medida da força e fadiga no músculo tratado. Descrevemos uma abordagem detalhada para avaliar mio-mecânicas em recém-explantado muscular hindlimb do mouse. Descrevemos a colheita atraumática do mouse músculo longus extensor dos dedos, a montagem do músculo em um músculo strip myograph (Modelo 820MS; Tecnologia Myo dinamarquês), ea medição da contração máxima e tensão tetânica, tempo de contração e relaxamento meia-hora, usando um quadrados de pulso estimulador (Modelo S48; Technologies Grass). Usando essas medidas, demonstramos o cálculo da contração muscular específica e tensão tetânica normalizada para a área muscular transversal, a contração-a-tetânica relação de tensão, a curva de relação força-freqüência ea curva de fadiga de baixa freqüência 4. Esta análise fornece um método para comparação quantitativa entre as intervenções terapêuticas em modelos do rato da doença muscular 1,2,3,5, bem como comparação dos efeitos de modificação genética em função muscular 6,7,8,9.

Para avaliar a<em&gt; In vivo</em&gt; Efeitos de intervenções terapêuticas para doenças musculares, são necessários métodos para quantificar a geração de força e cansaço no músculo tratado. Detalhamos uma abordagem para avaliar mio-mecânicas no músculo de rato explantado hindlimb. Esta análise proporciona uma abordagem robusta para quantificação dos efeitos da modificação genética na função muscular, bem como a comparação de tratamentos em modelos do rato da doença muscular.

Myo-mecânico Análise do músculo esquelético isolado

Para avaliar os efeitos in vivo de intervenções terapêuticas para o tratamento de doenças musculares 1,2,3, são necessários métodos quantitativos que meçam a força...

O objetivo deste procedimento é determinar a força gerada e a fatigabilidade do músculo esquelético isolado como forma de quantificar os efeitos de modificações genéticas ou terapias. Primeiro, o músculo extensor digitorum longus é dissecado da pata traseira do camundongo. Em seguida, o músculo é montado em um miógrafo para tiras musculares.O próximo passo é determinar a voltagem para estimulação e pré-tensão do músculo na qual é alcançada a tensão máxima de contração única. O passo final é determinar a relação força-frequência para o músculo, bem como o início e o grau de fadiga com estimulação tônica de baixa frequência. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram alterações mensuráveis nas propriedades mecânicas do músculo por meio da miografia.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como testes de exercício, é que a miografia permite uma avaliação quantitativa da força e função muscular. Adotamos este método pela primeira vez quando percebemos que medidas quantitativas para avaliar a função muscular são necessárias à medida que novas terapias baseadas em células e bioengenharia são testadas em modelos animais pré-clínicos. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da biologia muscular e da distrofia muscular, como se terapias específicas ou modificações genéticas alteram a função muscular.A demonstração visual deste método é essencial, pois os passos necessários para manipular adequadamente o músculo são difíceis de dominar. Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldades, porque a dissecação rápida e atraumática dos músculos do hindin exige prática e habilidade adquirida. A demonstração do procedimento será realizada por um pesquisador científico e SAB ler um estudante de pós-graduação em nossos laboratórios.Após a eutanásia de um camundongo, posicione o cadáver com a face ventral voltada para cima em uma bandeja de dissecação e fixe a pata à bandeja sob um microscópio estereoscópico. Abra a pele e abra cuidadosamente a fáscia. Em seguida, desprenda o músculo tibial anterior do tornozelo para cima, expondo o músculo extensor longo dos dedos ou músculo EDL.Use gotas de solução de ringer lactato para manter o músculo úmido durante a coleta. Em seguida, dissecar o músculo EDL preservando o máximo de tendão possível em cada extremidade, tomando cuidado para não tocar nas fibras musculares do EDL. Coloque o músculo EDL em uma placa de Petri contendo solução de ringer lactato.Agora amarre suturas a cada um dos tendões musculares. Estes estudos utilizam um banho de tecidos para segurar o músculo e um transdutor de força para medir a tensão muscular. Além disso, um estimulador elétrico de pulsos quadrados e uma plataforma de aquisição de dados são usados para provocar, registrar e analisar as respostas miomecânicas.O próximo passo é preencher o banho do enxerto mio com 6,5 mililitros de Krebs, portanto, solução satélite. Aqueça o banho a 25 graus Celsius e borbulhe a solução de Krebs com 95% oxigênio, 5% dióxido de carbono após borbulhar por 15 minutos. Use suturas nos tendões para transferir o músculo EDL para o banho.Fixe os tendões entre as presilhas do enxerto mio. Tenha cuidado para não prender o músculo propriamente dito. Mantenha o banho do enxerto mio a 25 graus Celsius.Para iniciar a análise da tensão, ajuste o comprimento inicial do músculo para que seja igual ao comprimento inicial do músculo. Utilizando uma duração do estímulo de 0,5 milissegundos. Aumente gradualmente a voltagem para determinar o estímulo necessário para obter a tensão máxima de contração rápida.Em seguida, ajuste o estímulo 20% mais alto para obter um estímulo supramáximo, que geralmente é de cerca de 40 volts. O próximo passo é esticar gradualmente o músculo até que não haja mais aumento na tensão do contração rápida. Este comprimento é considerado o comprimento muscular ótimo.Deixe o músculo equilibrar por três minutos, mantendo-o no seu comprimento ótimo. Aplique um estímulo quadrado supramáximo e registre a curva de tensão do espasmo. Nesta figura.A tensão máxima do tique é rotulada como pt. O tempo de contração é rotulado como ct. O tempo de meia-relaxação é rotulado como HRT.A barra representa um segundo após um período de repouso de três minutos. Meça a tensão tetânica aplicando uma série de estímulos supermáximos por 300 milissegundos a 150 hertz no comprimento ótimo. Este procedimento gera uma curva de tensão tetânica.A tensão titânica máxima é identificada como po. A tensão titânica de meia relaxação é identificada como HRTT. A barra representa um segundo após um período de repouso de três minutos.Inicie a análise da frequência-força aplicando trens de estímulos supramáximos de 300 milissegundos a trinta, sessenta, cem, cento e quarenta e 160 hertz. Aguarde três minutos de descanso entre cada trem de estímulos após um período de repouso de três minutos. Inicie a análise de fadiga aplicando trens de estímulos curtos a 60 hertz durante 300 milissegundos a cada três segundos, durante 10 minutos.A força da titina deve diminuir até um nível de platô de cerca de 15% do valor inicial. Após concluir as gravações de força com o músculo no comprimento ótimo, meça o diâmetro do músculo utilizando a ocular do microscópio. Em seguida, remova os pontos e pese o músculo para determinar a massa muscular.O último passo é pesar o camundongo para avaliar a massa corporal. Essas medidas são utilizadas para os cálculos listados no artigo acompanhante. Esta figura mostra o aumento da tensão gerada com o aumento das frequências de estímulo indicadas.Aqui está a resposta do músculo a uma sequência de pulsos em 30 hertz. Esta figura mostra a força maior solicitada em uma sequência de pulsos de 140 hertz. Este gráfico mostra a relação força-frequência representada como a porcentagem da força máxima versus a frequência de estimulação.A forma da curva de frequência da força é característica da força muscular e pode ser usada para fazer comparações entre músculos de diferentes animais. Esta figura demonstra a fadiga muscular ao longo de 10 minutos de estimulação de baixa frequência. Estas figuras mostram a resposta do músculo à série de estímulos nos pontos de tempo indicados.Este gráfico mostra a fadiga muscular de baixa frequência como um aumento da força máxima em porcentagem versus tempo. A forma da curva de fadiga de baixa frequência é característica da força muscular e pode ser usada para fazer comparações entre músculos de diferentes animais. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em 30 minutos após este procedimento.Outros métodos, como imunohistoquímica, western blot e PCR quantitativa, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como se e onde proteínas miogênicas específicas e marcadores de células-tronco estão sendo expressos no músculo tratado durante a tentativa deste procedimento. É importante lembrar-se de ter todo o seu equipamento preparado para minimizar o tempo entre a coleta do músculo e a análise. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como dissecar o membro posterior do músculo, montar o músculo em um miógrafo de fita muscular, como o que mostramos a você da Danish Myo Technology, e medir alterações nas propriedades mecânicas do músculo.

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Descrevemos um protocolo para obtenção de fibras enzimaticamente dissociadas de diferentes comprimentos e tipos de seis músculos de camundongos adultos: três deles já descritos (flexor curto dos dedos, extensor longo dos dedos, sóleo) e três deles dissociados com sucesso pela primeira vez (extensor longo do hálux, fibular longo, fibular dos dígitos).

Fibras musculares esqueléticas curtas, intermediárias e longas intactas obtidas por dissociação enzimática de seis músculos dos membros posteriores de camundongos: além do flexor curto dos dedos

Esse protocolo descreve o isolamento de fibras musculares únicas intactas do sóleo oxidativo e o estabelecimento de culturas de mioblast altamente purificadas derivadas dessas fibras. O procedimento otimizado gera de forma confiável aproximadamente 300–500 miofibras intactas por camundongo, permitindo análises moleculares e celulares posteriores.

Ensaio de Isolamento de Fibra Única para Avaliação do Comportamento da Miofibra Oxidativa

Aprenda a analisar força e fadiga do músculo esquelético isolado em camundongos usando miografia. Este método quantitativo avalia intervenções terapêuticas para doenças musculares em modelos pré-clínicos.

Myo-mecânico Análise do músculo esquelético isolado

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