Myo-mecânico Análise do músculo esquelético isolado

O objetivo deste procedimento é determinar a força gerada e a fadiga do músculo esquelético isolado como forma de quantificar os efeitos da modificação genética ou terapia. Primeiro, o músculo extensor mais longo dos dedos é dissecado do membro posterior do camundongo. Em seguida, o músculo é montado em uma tira muscular myo.

O próximo passo é determinar a voltagem para estimulação e pré-tensão do músculo na qual a tensão máxima de contração é alcançada. A etapa final é determinar a relação de frequência de força para o músculo, bem como o início e o grau de fadiga com baixa frequência para estimulação tânica. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram mudanças mensuráveis em minhas propriedades mecânicas do músculo por meio de miografia.

A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como o teste de esforço, é que a miografia permite uma avaliação quantitativa da força e função muscular. Adotamos esse método pela primeira vez quando percebemos que medidas quantitativas para avaliar a função muscular são necessárias à medida que novas terapias baseadas em células e bioengenharia para doenças musculares são testadas em modelos animais pré-clínicos. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia muscular e da distrofia muscular, como se terapias específicas ou modificações genéticas alteram a função muscular.

A demonstração visual desse método é crítica, pois as etapas necessárias para lidar adequadamente com o músculo são difíceis de dominar. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque uma dissecção rápida e traumática dos músculos posteriores requer prática e habilidade adquirida. A demonstração do procedimento será quando colocarmos um cientista pesquisador e SAB ler um estudante de pós-graduação em nossos laboratórios.

Após a eutanásia de um camundongo, arrume o lado ventral da carcaça para cima em uma bandeja de dissecação e prenda a perna na bandeja sob um microscópio de dissecação. Corte a pele e abra cuidadosamente a fáscia. Em seguida, descasque o músculo tibial anterior do tornozelo para cima para expor o extensor longo dos dedos ou o músculo EDL.

Use gotas de solução de ringer com lactato para manter o músculo úmido durante a colheita. Em seguida, disseque o EDL preservando o máximo de tendão possível em cada extremidade e tomando cuidado para não tocar nas próprias fibras musculares do EDL. Coloque o músculo EDL em uma placa de Petri contendo solução de ringer com lactato.

Agora amarre suturas em cada um dos tendões musculares. Esses estudos usam um banho de tecido para segurar o músculo e um transdutor de força para medir a tensão muscular. Além disso, um estimulador elétrico de pulso quadrado e uma plataforma de aquisição de dados são usados para obter registro e analisar minhas respostas mecânicas.

O próximo passo é encher o banho de mioenxerto com 6,5 mililitros de Krebs, portanto, solução satélite. Aqueça o banho a 25 graus Celsius borbulhe a solução de Krebs com 95% de oxigênio, 5% de dióxido de carbono após borbulhar por 15 minutos. Use suturas nos tendões para transferir o músculo EDL para o banho.

Prenda os tendões entre as pinças do mioenxerto. Tenha cuidado para não apertar o próprio músculo. Mantenha o banho de mioenxerto a 25 graus Celsius.

Para iniciar a análise da tensão, ajuste o comprimento inicial do músculo para que seja igual ao comprimento do músculo inci. Usando uma duração de estímulo de 0,5 milissegundos. Aumente gradualmente a tensão para determinar o estímulo necessário para obter a tensão máxima de contração.

Em seguida, defina o estímulo 20% mais alto para atingir um estímulo supramáximo, que geralmente é de cerca de 40 volts. O próximo passo é alongar gradualmente o músculo até que não haja mais aumento na tensão de contração. Este comprimento é considerado o comprimento ideal do músculo.

Deixe o músculo se equilibrar por três minutos e, em seguida, mantenha o músculo em seu comprimento ideal. Entregue um estímulo quadrado supramáximo e registre a saída, registre a curva de tensão de contração. Nesta figura.

A tensão máxima de contração é rotulada como pt. O tempo de contração é rotulado como ct. O tempo de meio relaxamento é rotulado como TRH.

A barra representa um segundo após um período de descanso de três minutos. Meça a tensão do Titanic aplicando uma tensão de estímulos supermáximos por 300 milissegundos a 150 hertz no comprimento ideal. Este procedimento gera uma curva de tensão do tétano.

A tensão máxima do Titanic é rotulada como po. A tensão do Titanic de meio relaxamento é rotulada como TRH. A barra representa um segundo Após um período de descanso de três minutos.

Comece a análise de frequência de força aplicando trens de 300 milissegundos de estímulos supermáximos a trinta e sessenta e cem, cento e quarenta e 160 hertz. Deixe três minutos de descanso entre cada trem de estímulos após um período de descanso de três minutos. Comece a análise de fadiga aplicando trens de taai curtos de 60 hertz por 300 milissegundos a cada três segundos por 10 minutos por 10 minutos.

A força do Titanic deve cair para um nível de platô de cerca de 15% do valor inicial. Depois de terminar os registros de força com o músculo no comprimento ideal, meça o diâmetro do músculo usando a ocular no microscópio. Em seguida, remova as suturas e pese o músculo para determinar a massa muscular.

O último passo é pesar o mouse para avaliar a massa corporal. Essas medidas são usadas para os cálculos listados no artigo anexo. Esta figura mostra o aumento da tensão gerada com o aumento das frequências de estímulo mostradas.

Aqui está a resposta do músculo a um trem de pulso a 30 hertz. Esta figura mostra a maior força solicitada em um trem de pulso de 140 hertz. Este gráfico mostra a relação de frequência de força plotada como a porcentagem de força máxima versus a frequência de estimulação.

A forma da curva de frequência de força é característica da força muscular e pode ser usada para fazer comparações entre músculos de diferentes animais. Este número demonstra fadiga muscular ao longo de 10 minutos de estimulação de baixa frequência. Essas figuras mostram a resposta do músculo ao treinamento de estímulos nos pontos de tempo indicados.

Este gráfico mostra a fadiga muscular de baixa frequência como um acréscimo da porcentagem de força máxima versus tempo. A forma da curva de fadiga de baixa frequência é característica da força muscular e pode ser usada para fazer comparações entre músculos de diferentes animais. Uma vez dominada, esta técnica pode ser feita em 30 minutos Após este procedimento.

Outros métodos, como imuno-histoquímica, western blot e PCR quantitativo, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como se proteínas miogênicas específicas e marcadores de células-tronco estão sendo expressos no músculo tratado durante a tentativa deste procedimento. É importante lembrar de ter todo o seu equipamento pronto para minimizar o tempo entre a colheita muscular e a análise. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como dissecar o músculo membro posterior, montar o músculo em uma tira muscular myo, como a que mostramos da tecnologia myo dinamarquesa e medir as mudanças em minhas propriedades mecânicas.