Name: Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Aprenda a microdissecção de cérebro de rato em quatro regiões: bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo. Este método preserva a integridade do RNA e proteína para pesquisas em neurociência.

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Passo 1 Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície. Passo 2 Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="01-269_Figure" width="474" height="224" /> Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato Passo 3 Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269_Figure-02" width="564" height="145" /> Figura 2. Dissecção bulbo olfatório Passo 4 Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269_Figure-03" width="566" height="220" /> Figura 3. Dissecção córtex frontal Passo 5 Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269_Figure-04" width="555" height="208" /> Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado) Passo 6 Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269_Figure-05" width="559" height="191" /> Figura 5. Dissecção hipocampo

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovada pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) na Universidade de Hong Kong e de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para uso animal.

Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.

<table><tbody><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ferramentas de dissecação</td><td></td><td></td><td>Placa de metal, pinça, lâmina, etc. Embaladas individualmente com folha de alumínio e aquecidas a 180 °C por oito horas para eliminar RNase. Resfriadas em gelo antes do uso.</td></tr></tbody></table>

micro-dissecção de cérebro de um rato para rna ou extração de proteína da região específica do cérebro

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

A microdissecção do cérebro de rato em diversas regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra...

Olá, sou o Quint, do Departamento de Anatomia da Universidade de Hong Kong. Hoje vou apresentar como realizar a microdissecação do cérebro vermelho em quatro vias principais: córtex pré-frontal, fórmica, estrato e hipocampo. Aqui está uma imagem esquemática que mostra como realizamos a dissecação do cérebro.Há três cortes. O primeiro plano de corte está na conexão entre o bulbo olfativo e o córtex frontal. O segundo plano de corte está na região do corpo caloso.O terceiro plano de corte está na ponta anterior dos fôniques. Após três cortes, haverá quatro trajetos cerebrais. No lado esquerdo está um fator.No lado direito está o hipocampo. O córtex frontal situa-se entre o primeiro e o segundo corte. A nucleases codificadora, que faz parte do estrato, localiza-se entre o segundo e o terceiro corte no hemisfério cerebral fresco.É muito importante reconhecer primeiro o corpo caloso e as fibras longitudinais. Em seguida, podemos localizar facilmente os três cortes. O primeiro plano de corte está na conexão entre o bulbo olfativo e o córtex frontal.O segundo plano de corte está em uma região do corpo caloso, e o terceiro plano de corte está na extremidade anterior dos fones. Vamos dissec

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O perfilamento da expressão de RNA em regiões discretas do cérebro de camundongos exige uma estratégia precisa e repetível de coleta de tecidos. Aqui é descrito um protocolo que utiliza o seccionamento coronal do cérebro e a microdissecação assistida por perfurador de tecidos. O rendimento e a qualidade do RNA total obtido a partir das amostras resultantes confirmam a utilidade do método descrito.

Laser não-Abordagem Microscopia de captura para o Microdissecção de regiões cerebrais discretas Mouse para isolamento de RNA total e Seqüenciamento Next-Generation Downstream e perfil de expressão gênica

Nós descrevemos um modelo de rato do transtorno de estresse pós-traumático (TEPT), que revela as alterações persistentes na função neuroendócrina eo atraso de longo prazo, resposta de medo exagerado, característico de pacientes com TEPT. O modelo animal e os métodos descritos aqui são úteis para correlacionar biomarcadores em núcleos do cérebro, que são mecanicista, mas não pode ser medido em pacientes com biomarcadores em células brancas do sangue periférico, os quais podem.

Biomarcadores em um modelo animal para Revelando correlatos neurais, hematológica e Comportamental do TEPT

Este vídeo demonstra o processo de isolamento de microvasos cerebrais de ratos sacrificados. Inclui a dissecção do cérebro, limpeza do tecido e digestão mecânica, seguida de centrifugação repetida para isolar a fração pura dos microvasos.

Um método para o isolamento de unidades neurovasculares do cérebro de ratos

Este vídeo demonstra a detecção da síntese de RNA do receptor de serotonina usando sondas de oligonucleotídeos no tecido cerebral de ratos afetado pela síndrome da serotonina. O protocolo inclui pré-tratamento de tecido, hibridização por sonda e detecção enzimática para visualizar e quantificar a expressão do RNA do receptor de serotonina ao microscópio.

Hibridização in situ usando sondas de oligonucleotídeos para estudar a expressão de RNA em seções cerebrais de ratos

Gene análise de um subconjunto de células num tecido específico de expressão representa um grande desafio. Este artigo descreve como isolar RNA total de alta qualidade a partir de uma população de células específicas, combinando um método rápido imunomarcação com captura a laser microdissection.

Isolamento de RNA celular subpopulações específicas Utilizando captura de Laser Microdissection combinada com o rápido immunolabeling

Aqui, um método para isolamento de microvessels de cérebro de rato e para a preparação de amostras de membrana é descrito. Este protocolo tem a clara vantagem de produzir microvessel enriquecido amostras com proteína aceitável de rendimento de animais individuais. Amostras podem ser usadas para as análises de proteína robusto no endotélio microvascular cerebral.

Um método simples e reprodutível para preparar amostras de membrana de Microvessels de cérebro de rato recém isoladas

Nós fornecemos um protocolo para o isolamento da microglia de diferentes regiões dissecadas de um hemisfério cerebral de camundongo adulto, seguido de preparação de biblioteca semi-automatizada para sequenciamento profundo de RNA unicelular de transcrições completas. Este método ajudará a elucidar a heterogeneidade funcional da microglia na saúde e na doença.

Isolamento da Microglia específica da Região de um hemisfério cerebral de camundongo adulto para sequenciamento profundo de RNA unicelular

Este procedimento descreve a coleção de regiões cerebrais congeladas discretas para obter proteínas de alta qualidade e RNA usando ferramentas baratas e comumente disponíveis.

Coleção de regiões cerebrais de roedores congelados para análises a jusante

Apresentamos um protocolo prático, passo a passo, rápido para remoção do cérebro do rato e dissecção de regiões discretas de tecido cerebral fresco. A obtenção de regiões cerebrais para análise molecular tornou-se rotina em muitos laboratórios de neurociência. Essas regiões cerebrais são imediatamente congeladas para obter dados transcriômicos de alta qualidade para análise de nível de sistema.

Microdisseção do Cérebro de Camundongos em Regiões Funcional e Anatomicamente Diferentes

A combinação de microdissecção de captura a laser e RT-qPCR microfluídica fornece especificidade anatômica e biotécnica na medição do transcriptoma em neurônios únicos e glia. A aplicação de métodos criativos com a abordagem biológica de um sistema para doenças psiquiátricas pode levar a avanços na compreensão e tratamento, como a hipótese anti-recompensa da neuroinflamação no vício.

Investigando Drivers de Anti-recompensa no Comportamento de Dependência com Métodos de Expressão Gênica de Célula Única Anatomicamente Específicos

Aprenda a microdissecção de cérebro de rato em quatro regiões: bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo. Este método preserva a integridade do RNA e proteína para pesquisas em neurociência.

Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

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