Name: Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Aprenda a criar um modelo de trombose da veia cava inferior em camundongos para estudar trombogenese e resolução do trombo. Este método permite quantificar o tecido da parede venosa e avaliar a progressão da inflamação aguda para crônica.

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1. Anestesia Procedimentos do mouse <ol><li> Os animais são removidos de suas gaiolas e colocados em uma câmara de indução anestésica pré-operatória para a indução de gás em 5% isoflurano e oxigênio a 100%, a uma vazão de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada). </li><li> Os ratos são sedados na câmara de indução anestésica, removido da câmara e do abdômen ventral é raspada com tosquiadeiras elétricas, ou mantidos dentro da câmara se um creme depilatório cabelo é usado (1min). </li><li> Enquanto ainda sob sedação, eles são pesados, os olhos são lubrificados com pomada oftálmica estéril e, em seguida, colocado em um recumbancy dorsal em uma água quente circulando dispositivo de aquecimento sob anestesia geral, com um cone de nariz, usando isoflurano e oxigênio. Neste ponto, a taxa de oxigênio é reduzida para 0,2 litros por minuto. </li><li> O abdômen é pulverizado com solução de clorexidina (diacetato de clorexidina é rapidamente bacterialcidal e persistente) e limpo com gaze estéril ou até três vezes o local da cirurgia está limpo. </li></ol> 2. Rato Micro-cirúrgico e procedimentos de recuperação <ol><li> A incisão mediana ventral (2cm) é feita com tesoura de íris através da pele e parede abdominal expondo o abdome. A gaze embebida 2x2in salina estéril é usada para refletir os intestinos para o lado esquerdo do animal. Um limitador do mouse é colocado no lugar permitindo a visualização da veia cava inferior (VCI). </li><li> Neste ponto, um nível de manutenção de isoflurance 2% e taxa de oxigênio a 100% de 0,2 litros / min é utilizado para o restante do procedimento cirúrgico. </li><li> Dissecção romba é facilitada utilizando um cotonete aplicador estéril e extra delicadas meia íris pinça curva. Cuidados devem ser tomados no manuseio do mouse para tecidos que são extremamente frágeis. Ao entrar na cavidade abdominal, use uma gaze embebida 4x4in salina estéril para refletir e exteriorizar os intestinos em uma cortina estéril, permitindo assim a visualização da VCI. </li><li> Todos os ramos de volta IVC, a partir das veias renais até a bifurcação ilíaca, são cauterizados enquanto ramos laterais são ligadas com fio 7-0 suturas não-reativo prolene. </li><li> O IVC é separada da aorta, logo abaixo das veias renais. 7-0 prolene é utilizado para ligadura da VCI. </li><li> O site laparotomia é fechada em uma forma de duas camadas. Nosso laboratório emprega vicryl 5-0, uma sutura sintética, em um padrão contínuo para fechar a parede abdominal. Cola adesivo de pele é usado para fechar a pele. Não há suturas externas para remoção. </li><li> Ratos são então recuperados em uma gaiola de rato individual, observado no pós-operatório (45 minutos a 2 horas), sob uma lâmpada de aquecimento (distância mínima-24 centímetros de distância da gaiola), em seguida, voltaram para suas unidades habitacionais original. Medicação para dor e anti-inflamatórios podem ser usados ​​se não interferir com o objetivo do estudo. Justificação científica de reter medicamentos para a dor, veterinária, e aprovação ICUCA são necessários. Nosso laboratório descobriu que a buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg ² é um analgésico excelente pré-e pós-operatório para os ratos. Além disso, Lidocaína a 4mg/kg (0,4 ml / kg de uma solução a 1%) pode ser infundida no local da incisão, quando analgésicos sistêmicos possam confundir os resultados experimentais. </li><li> Animais Sham de cada grupo experimental submetido a dissecção, utilizados para o tratamento cirúrgico, com exceção do IVC ou qualquer ramos de drenagem não estão ligados ou cauterizados. </li><li> A eutanásia é realizada de acordo com as recomendações estabelecidas pela American Veterinary Medical Association Orientações sobre a eutanásia para roedores. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O Mouse Modelo Completo de Stasis Inferior Trombose da veia cava pode ser executada em várias cepas de ratos de diferentes idades. O modelo é mais adequado para ratos de pelo menos 20 gramas de peso. Este modelo animal de trombose venosa permite que os investigadores a estudar as interações inflamatória entre a parede da veia eo trombo oclusiva venosa. Pela nossa experiência, descobrimos que 10 ou mais animais por grupo são necessários para obter significância estatística entre os grupos para os pesos trombo, parede da ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Artigos e Equipamentos </td></tr><tr><td> Gás isoflurano </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 sutura </td></tr><tr><td> Fio de vicryl 5-0 </td></tr><tr><td> Cola da pele </td></tr><tr><td> Olho lubrificante </td></tr><tr><td> Nolvasan solução ou solução bacteriostática </td></tr><tr><td> Âmbito estereomicroscópio </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Aplicadores de algodão </td></tr><tr><td> Gaze 2x2 </td></tr><tr><td> Almofada de aquecimento </td></tr><tr><td> Máquina de anestesia </td></tr><tr><td> Conta de vidro instrumento esterilizador </td></tr><tr><td> Micro instrumentos cirúrgicos </td></tr><tr><td> Limitadores abdominal </td></tr></tbody></table>

modelo do mouse completa de stasis inferior trombose da veia cava

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Tromboembolismo venoso (TEV) inclui tanto a trombose venosa profunda (TVP) e embolia pulmonar (PE). Nos Estados Unidos (EUA), a alta morbidade e mortalidade fazer TEV um problema de saúde 1-2. Depois de doença cardíaca e acidente vascular cerebral, tromboembolismo venoso é a 3 terceira doença mais comum vascular. Em os EUA sozinhos, há um número estimado de 900.000 pessoas afetadas a cada ano, com 300.000 mortes que ocorrem anualmente 3. A confiança in vivo modelo animal para estudar os mecanismos da doença é necessário. As vantagens de usar o mouse modelo de estase completa de veia cava inferior trombose são várias. O modelo do mouse permite a administração de volumes muito pequenos de agentes de teste limitado de disponibilidade, reduzindo drasticamente os custos. Mais promissor é o potencial de camundongos com nocautes gene que permitem funções específicas do fator inflamatório e coagulação a ser delineados. Atual ensaios moleculares permitem a quantificação da parede da veia, o sangue, trombo todo, e para ensaios de plasma. No entanto, uma das principais preocupações que envolvem este modelo é a restrições de tamanho operatório ea friabilidade dos vasos. Além disso, devido ao pequeno peso da amostra IVC (média 0,005 gramas) é necessário para aumentar o número de animais para análise estatística exata para o tecido, trombo, e exames de sangue, tais como real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, imunoenzimático (ELISA), zimografia parede da veia, e análise de celulares trombo, e sangue total e plasma ensaios 4-8. A principal desvantagem com o modelo de estase é que a falta de fluxo sanguíneo inibe o efeito máximo da administração sistêmica de agentes terapêuticos sobre o trombo ea parede da veia.

O rato modelo estase completa de veia cava inferior trombose produz quantidades mensuráveis ​​de tecido veia parede e trombo. Ele tem se mostrado útil para avaliar as interações entre a parede da veia eo trombo oclusivo e na avaliação da progressão de aguda a inflamação crônica.

Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava

O tromboembolismo venoso (TEV) inclui tanto a trombose venosa profunda (TVP) quanto a embolia pulmonar (EP). Nos Estados Unidos (E.U.), a alta morbidade e...

O objetivo geral deste procedimento é ligar a veia cava inferior, causando uma estase completa que resulta em um trombo para o estudo da trombogênese e da resolução. Isso é realizado primeiramente expondo a veia cava inferior por meio de uma incisão mediana ventral. Em seguida, todos os ramos tributários laterais e posteriores são localizados e, ou cauterizados ou ligados.Em seguida, a veia cava inferior é separada da aorta abaixo das veias renais e ligada. Por fim, a veia cava inferior e o trombo são coletados em diferentes momentos para avaliação molecular. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostraram o grau de carga trombótica até o sexto dia.O modelo murino de ligadura da veia cava inferior foi desenvolvido em nosso laboratório para estudar camundongos com genes deletados. A demonstração visual desse modelo cirúrgico é fundamental, pois os passos do procedimento são difíceis de aprender devido às técnicas microcirúrgicas necessárias para executar este protocolo. Para começar, anestesie o animal em uma câmara de indução anestésica pré-operatória com 5% de isoflurano e 100% de oxigênio a uma taxa de 0,5 litro por minuto.Retire o animal da câmara, segure-o em decúbito dorsal e rape o abdômen ventral com tesouras elétricas. Em seguida, pese o animal. Depois, lubrifique os olhos com uma pomada oftálmica estéril.Coloque o animal em decúbito dorsal sobre uma manta térmica com água aquecida, sob anestesia geral com isoflurano e oxigênio. Pulverize o abdômen com solução de clorexidina e limpe com gaze estéril. Desinfete o abdômen até que o local cirúrgico esteja limpo para iniciar a cirurgia.Usando tesoura de íris, faça uma incisão mediana ventral através da pele e da parede abdominal, expondo o abdômen com gaze estéril embebida em solução salina. Desvie os intestinos do animal para o lado esquerdo. Utilize um restritor para camundongos para expor a veia cava inferior ou VCI.A partir deste passo e durante o restante da cirurgia, mantenha a anestesia com 2% de isoflurano, 100% de oxigênio a uma taxa de 0,2 litros por minuto. Utilizando um cotonete estéril e pin&ccedil;as de tecido para &iacute;ris extrafinas, realize uma disseca&ccedil;&atilde;o romba da f&aacute;scia abdominal para expor a veia cava inferior e todos os seus ramos.Primeiro, cauterize todos os ramos colaterais da VCI desde as veias renais até a bifurcação ilíaca. Em seguida, ligue os ramos laterais com sete suturas de polipropileno não reativas. Separe a VCI da aorta logo abaixo das veias renais.Use suturas de prolina sete-zero para ligar a VCI. Feche a parede abdominal usando cinco suturas sintéticas de Vicryl. Em seguida, aplique cola adesiva para pele para fechar a pele.Monitore o animal em uma gaiola de recuperação sob lâmpada de aquecimento, depois devolva o animal à sua unidade de alojamento original. Esta análise compara camundongos controle e animais submetidos à ligadura da VCI e trombose no momento da eutanásia. No segundo ou sexto dia, o trombo da VCI e a parede venosa associada foram removidos e pesados.A medição do peso do trombo permite ao pesquisador documentar o grau de trombose e seu grau de resolução ao longo do tempo. É um indicador do evento inflamatório associado à ativação das células endoteliais. A medição também é uma indicação útil da eficácia de um agente terapêutico na redução da inflamação e da quantidade de trombo na parede venosa. Aqui, a veia cava inferior juntamente com a aorta foi removida.Seção embutida em parafina cortada em lâminas e corada com hematina e eosina. Este gráfico representa o número de células polimorfonucleares ou PMNs nos tecidos de camundongos controle versus camundongos experimentais. A medição das populações de células inflamatórias na parede venosa é utilizada para documentar a resposta inflamatória natural aguda a crônica na parede venosa com trombos venosos presentes em um animal normal; uma resposta inflamatória aguda no segundo dia deve ser predominantemente de neutrófilos.Conforme indicado nesta figura, se nenhuma infecção estiver presente, a população de neutrófilos na parede venosa deve diminuir após o segundo dia. No nosso modelo murino de trombose venosa. Aqui, o número de monócitos na parede venosa é comparado.Uma resposta inflamatória na parede venosa mais subaguda e crônica mostrará aumentos. Nas populações de monócitos na parede venosa, os monócitos secretam enzimas proteolíticas, que demonstraram promover a resolução natural do trombo venoso. Com o tempo, na ausência de infecção, a partir deste vídeo, você agora deverá ter uma boa compreensão de como realizar nosso modelo de ligadura da veia cava inferior.Este modelo é excelente para estudar a trombogênese e a resolução do trombo ao longo do tempo.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

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Aprenda a criar um modelo de trombose da veia cava inferior em camundongos para estudar trombogenese e resolução do trombo. Este método permite quantificar o tecido da parede venosa e avaliar a progressão da inflamação aguda para crônica.

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