Name: Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Aprenda a criar um modelo de trombose da veia cava inferior em camundongos para estudar trombogenese e resolução do trombo. Este método permite quantificar o tecido da parede venosa e avaliar a progressão da inflamação aguda para crônica.

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1. Anestesia Procedimentos do mouse <ol><li> Os animais são removidos de suas gaiolas e colocados em uma câmara de indução anestésica pré-operatória para a indução de gás em 5% isoflurano e oxigênio a 100%, a uma vazão de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada). </li><li> Os ratos são sedados na câmara de indução anestésica, removido da câmara e do abdômen ventral é raspada com tosquiadeiras elétricas, ou mantidos dentro da câmara se um creme depilatório cabelo é usado (1min). </li><li> Enquanto ainda sob sedação, eles são pesados, os olhos são lubrificados com pomada oftálmica estéril e, em seguida, colocado em um recumbancy dorsal em uma água quente circulando dispositivo de aquecimento sob anestesia geral, com um cone de nariz, usando isoflurano e oxigênio. Neste ponto, a taxa de oxigênio é reduzida para 0,2 litros por minuto. </li><li> O abdômen é pulverizado com solução de clorexidina (diacetato de clorexidina é rapidamente bacterialcidal e persistente) e limpo com gaze estéril ou até três vezes o local da cirurgia está limpo. </li></ol> 2. Rato Micro-cirúrgico e procedimentos de recuperação <ol><li> A incisão mediana ventral (2cm) é feita com tesoura de íris através da pele e parede abdominal expondo o abdome. A gaze embebida 2x2in salina estéril é usada para refletir os intestinos para o lado esquerdo do animal. Um limitador do mouse é colocado no lugar permitindo a visualização da veia cava inferior (VCI). </li><li> Neste ponto, um nível de manutenção de isoflurance 2% e taxa de oxigênio a 100% de 0,2 litros / min é utilizado para o restante do procedimento cirúrgico. </li><li> Dissecção romba é facilitada utilizando um cotonete aplicador estéril e extra delicadas meia íris pinça curva. Cuidados devem ser tomados no manuseio do mouse para tecidos que são extremamente frágeis. Ao entrar na cavidade abdominal, use uma gaze embebida 4x4in salina estéril para refletir e exteriorizar os intestinos em uma cortina estéril, permitindo assim a visualização da VCI. </li><li> Todos os ramos de volta IVC, a partir das veias renais até a bifurcação ilíaca, são cauterizados enquanto ramos laterais são ligadas com fio 7-0 suturas não-reativo prolene. </li><li> O IVC é separada da aorta, logo abaixo das veias renais. 7-0 prolene é utilizado para ligadura da VCI. </li><li> O site laparotomia é fechada em uma forma de duas camadas. Nosso laboratório emprega vicryl 5-0, uma sutura sintética, em um padrão contínuo para fechar a parede abdominal. Cola adesivo de pele é usado para fechar a pele. Não há suturas externas para remoção. </li><li> Ratos são então recuperados em uma gaiola de rato individual, observado no pós-operatório (45 minutos a 2 horas), sob uma lâmpada de aquecimento (distância mínima-24 centímetros de distância da gaiola), em seguida, voltaram para suas unidades habitacionais original. Medicação para dor e anti-inflamatórios podem ser usados ​​se não interferir com o objetivo do estudo. Justificação científica de reter medicamentos para a dor, veterinária, e aprovação ICUCA são necessários. Nosso laboratório descobriu que a buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg ² é um analgésico excelente pré-e pós-operatório para os ratos. Além disso, Lidocaína a 4mg/kg (0,4 ml / kg de uma solução a 1%) pode ser infundida no local da incisão, quando analgésicos sistêmicos possam confundir os resultados experimentais. </li><li> Animais Sham de cada grupo experimental submetido a dissecção, utilizados para o tratamento cirúrgico, com exceção do IVC ou qualquer ramos de drenagem não estão ligados ou cauterizados. </li><li> A eutanásia é realizada de acordo com as recomendações estabelecidas pela American Veterinary Medical Association Orientações sobre a eutanásia para roedores. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O Mouse Modelo Completo de Stasis Inferior Trombose da veia cava pode ser executada em várias cepas de ratos de diferentes idades. O modelo é mais adequado para ratos de pelo menos 20 gramas de peso. Este modelo animal de trombose venosa permite que os investigadores a estudar as interações inflamatória entre a parede da veia eo trombo oclusiva venosa. Pela nossa experiência, descobrimos que 10 ou mais animais por grupo são necessários para obter significância estatística entre os grupos para os pesos trombo, parede da ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Artigos e Equipamentos </td></tr><tr><td> Gás isoflurano </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 sutura </td></tr><tr><td> Fio de vicryl 5-0 </td></tr><tr><td> Cola da pele </td></tr><tr><td> Olho lubrificante </td></tr><tr><td> Nolvasan solução ou solução bacteriostática </td></tr><tr><td> Âmbito estereomicroscópio </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Aplicadores de algodão </td></tr><tr><td> Gaze 2x2 </td></tr><tr><td> Almofada de aquecimento </td></tr><tr><td> Máquina de anestesia </td></tr><tr><td> Conta de vidro instrumento esterilizador </td></tr><tr><td> Micro instrumentos cirúrgicos </td></tr><tr><td> Limitadores abdominal </td></tr></tbody></table>

modelo do mouse completa de stasis inferior trombose da veia cava

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Tromboembolismo venoso (TEV) inclui tanto a trombose venosa profunda (TVP) e embolia pulmonar (PE). Nos Estados Unidos (EUA), a alta morbidade e mortalidade fazer TEV um problema de saúde 1-2. Depois de doença cardíaca e acidente vascular cerebral, tromboembolismo venoso é a 3 terceira doença mais comum vascular. Em os EUA sozinhos, há um número estimado de 900.000 pessoas afetadas a cada ano, com 300.000 mortes que ocorrem anualmente 3. A confiança in vivo modelo animal para estudar os mecanismos da doença é necessário. As vantagens de usar o mouse modelo de estase completa de veia cava inferior trombose são várias. O modelo do mouse permite a administração de volumes muito pequenos de agentes de teste limitado de disponibilidade, reduzindo drasticamente os custos. Mais promissor é o potencial de camundongos com nocautes gene que permitem funções específicas do fator inflamatório e coagulação a ser delineados. Atual ensaios moleculares permitem a quantificação da parede da veia, o sangue, trombo todo, e para ensaios de plasma. No entanto, uma das principais preocupações que envolvem este modelo é a restrições de tamanho operatório ea friabilidade dos vasos. Além disso, devido ao pequeno peso da amostra IVC (média 0,005 gramas) é necessário para aumentar o número de animais para análise estatística exata para o tecido, trombo, e exames de sangue, tais como real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, imunoenzimático (ELISA), zimografia parede da veia, e análise de celulares trombo, e sangue total e plasma ensaios 4-8. A principal desvantagem com o modelo de estase é que a falta de fluxo sanguíneo inibe o efeito máximo da administração sistêmica de agentes terapêuticos sobre o trombo ea parede da veia.

O rato modelo estase completa de veia cava inferior trombose produz quantidades mensuráveis ​​de tecido veia parede e trombo. Ele tem se mostrado útil para avaliar as interações entre a parede da veia eo trombo oclusivo e na avaliação da progressão de aguda a inflamação crônica.

Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava

O tromboembolismo venoso (TEV) inclui tanto a trombose venosa profunda (TVP) quanto a embolia pulmonar (EP). Nos Estados Unidos (E.U.), a alta morbidade e...

O objetivo geral deste procedimento é ligar a veia cava inferior, causando uma estase completa que resulta em um trombo para o estudo da trombogênese e da resolução. Isso é realizado primeiramente expondo a veia cava inferior por meio de uma incisão mediana ventral. Em seguida, todos os ramos tributários laterais e posteriores são localizados e, ou cauterizados ou ligados.Em seguida, a veia cava inferior é separada da aorta abaixo das veias renais e ligada. Por fim, a veia cava inferior e o trombo são coletados em diferentes momentos para avaliação molecular. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostraram o grau de carga trombótica até o sexto dia.O modelo murino de ligadura da veia cava inferior foi desenvolvido em nosso laboratório para estudar camundongos com genes deletados. A demonstração visual desse modelo cirúrgico é fundamental, pois os passos do procedimento são difíceis de aprender devido às técnicas microcirúrgicas necessárias para executar este protocolo. Para começar, anestesie o animal em uma câmara de indução anestésica pré-operatória com 5% de isoflurano e 100% de oxigênio a uma taxa de 0,5 litro por minuto.Retire o animal da câmara, segure-o em decú

mouse-complete-stasis-model-of-inferior-vena-cava-thrombosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

A indução eletrolítico de ativação endotelial na superfície interna da Vena Cava Inferior resultados na formação venosa tipo trombo devido à ativação endotelial e parciais a estagnação do sangue, dois componentes da tríade de Virchow.

Eletrolítico Veia Cava Inferior Model (EIM) de trombose venosa

Este vídeo demonstra o procedimento de replicação de um acidente vascular cerebral trombótico em um modelo de camundongo, bloqueando a artéria carótida comum direita e expondo o camundongo a um ambiente com baixo teor de oxigênio. Esse processo reduz o fluxo de sangue e oxigênio para o cérebro, causando a formação de coágulos sanguíneos e danos cerebrais.

Induzindo AVC trombótico por hipóxia e isquemia em um modelo de camundongo

Descrevemos aqui estenose na veia cava inferior como um modelo murino de trombose venosa profunda. Este modelo recapitula a restrição do fluxo de sangue, um dos principais gatilhos de trombose venosa em seres humanos.

Estenose da veia Cava Inferior: um modelo murino de trombose venosa profunda

O presente protocolo descreve as etapas para obter a trombose venosa, usando um modelo de estase. Além disso, estamos usando um método não-invasivo para medir a formação de trombos e resolução ao longo do tempo.

Trombose venosa profunda induzida por estase em camundongos monitorado por ultra-sonografia de alta frequência

Uma fístula aortocaval foi criada puncionando a aorta infra-renal murino através de ambas as paredes na veia inferior oca e foi seguida pela criação de um stenosis em seu saída através da ligadura parcial da veia inferior oca. Este modelo reprodutível pode ser usado para estudar a estenose venosa central.

Modelo murino de estenose venosa central usando fístula Aortocaval com estenose de saída

Aqui, estabelecemos um novo modelo de rato Sprague-Dawley (SD) de trombose sagital superior (SSS) através de um método de embolização de roscas, e a estabilidade e confiabilidade do modelo foram verificadas.<br...

Estabelecimento de um Modelo de Rato de Oclusão Superior Sagittal-Sinus através de um Método thread-embolia

Este artigo tem como objetivo apresentar um método otimizado para avaliação da trombose venosa em modelo de câncer em camundongos, utilizando clipes vasculares para a ligadura venosa. A otimização minimiza a variabilidade nas medidas relacionadas à trombose e aumenta a relevância para a trombose venosa associada ao câncer humano.

Ensaio de Trombose Venosa em Modelo de Câncer em Camundongos

O protocolo apresenta um modelo de roedor de sobrevivência para testar intervenções com balão de venoplastia (VB) em veias profundas não trombóticas, trombóticas e pós-trombóticas.

Modelo de balão de venoplastia de veia cava inferior de roedores

Para melhorar o nosso conhecimento da formação neotissue celular e molecular, um modelo murino da TEVG foi recentemente desenvolvida. Os enxertos foram implantados como infra-enxertos na veia cava de interposição em camundongos C57BL / 6. Este modelo consegue resultados semelhantes aos obtidos em nossa investigação clínica, mas ao longo de um curso de tempo muito reduzido.

Implantação de Veia Cava Inferior interposição de enxerto no Rato Modelo

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Aprenda a criar um modelo de trombose da veia cava inferior em camundongos para estudar trombogenese e resolução do trombo. Este método permite quantificar o tecido da parede venosa e avaliar a progressão da inflamação aguda para crônica.

Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava

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