Restrição manual e rotas de Administração composto comum em camundongos e ratos

O objetivo geral do seguinte vídeo é familiarizar o espectador com diversas técnicas utilizadas para contenção manual e administração de compostos em camundongos e ratos. Camundongos e ratos podem ser contidos por meio de várias técnicas com uma ou duas mãos ou com o uso de dispositivos plásticos de contenção. As técnicas para administração de compostos, como via intraperitoneal, subcutânea, intravascular e intradérmica, são apresentadas neste vídeo, assim como os métodos de injeção, gavagem oral e administração intranasal.

Aprender a manipular animais com confiança, gentileza e segurança é uma parte importante da pesquisa in vivo. Os animais devem sempre ser manipulados de maneira segura tanto para o animal quanto para o pesquisador. Geralmente, as pessoas novas nesses métodos podem ter dificuldades, pois leva tempo para se tornar confortável trabalhar com roedores.

Roedores também podem intimidar ou assustar pessoas novas no trabalho com eles. A demonstração visual da administração da dose e das técnicas de contenção é fundamental tanto para a administração bem-sucedida do composto quanto para prevenir estresse ou lesões ao animal e ao operador. Camundongos podem ser contidos manualmente utilizando-se uma técnica com uma ou duas mãos.

O primeiro passo de qualquer método é levantar suavemente o camundongo pela base da cauda e colocá-lo sobre a grade de arame da tampa da gaiola ou sobre uma superfície áspera semelhante. Para a técnica com uma mão, encaixe a base da cauda entre o terceiro e o quarto dedo enquanto puxa suavemente a cauda para trás. Isso fará com que o camundongo segure a superfície e puxe-se para frente.

Em seguida, segure firmemente o camundongo pela nuca com a mesma mão que está segurando a cauda. Segure com o indicador e o polegar próximos à base da cabeça e prolongue o segure ao longo das costas incorporando o dedo médio e o anelar.

Certifique-se de aplicar pressão suficiente na pele ao redor do pescoço para impedir que o camundongo gire ou se torça, mas não tanta que o animal não consiga respirar. A técnica com as duas mãos é semelhante, exceto pelo fato de que, enquanto uma das mãos puxa suavemente a cauda para trás, a outra mão segura rapidamente e com firmeza o camundongo pela nuca, com a cauda em uma mão e a nuca na outra. Levante o camundongo e encaixe a base da cauda entre a palma da mão e o terceiro ou quarto dedo da mão que segura a nuca.

Como antes, certifique-se de que o aperto está firme, mas ainda permite que o animal respire. O procedimento de segurar a nuca da rata é geralmente realizado com as duas mãos. Primeiro, retire a rata de sua gaiola e coloque-a sobre uma superfície áspera.

Em seguida, segure o rato pela cauda com a mão não dominante e puxe suavemente para trás. Segure firmemente a cauda com uma das mãos e, com a outra, aproxime-se da nuca do rato vindo de trás. Aplique pressão suave sobre a parte dorsal do rato enquanto se desloca em direção às escápulas.

E, finalmente, segure a pele do pescoço entre os dedos e a palma da mão. Os ratos podem vocalizar quando contidos dessa maneira. Ao usar o aperto por cima do ombro, segure o rato pela cauda com a mão dominante e puxe suavemente para trás.

Em seguida, coloque a mão não dominante sobre as costas da rata, aproximando-se por trás. Segure a rata ao redor do tórax com o dedo anelar, mindinho e polegar. A cabeça da rata deve ficar entre o indicador e o dedo médio.

Outro método de contenção é o seguramento sob os ombros. Segure a cauda com a mão dominante, como visto anteriormente, e coloque a mão não dominante sobre as costas da rata, aproximando-se por trás. Em seguida, segure o rato ao redor do tórax logo abaixo das escápulas.

Os antebraços da rata devem ser suavemente empurrados para cima com o polegar e o indicador. Os antebraços devem cruzar-se sob o queixo da rata, impedindo-a de morder. A rata pode ser segurada dessa maneira com uma mão, desde que o corpo seja estabilizado contra o manipulador.

Um cone flexível em forma de funil feito de plástico fino, chamado cone de decapic, também pode ser usado para contenção. Empurre o animal para a frente até que seu focinho saia pelo orifício na extremidade do cone de decapic; segure a abertura fechada ao redor da cauda ou use um elástico ou prendedor para fixar o animal no lugar. Uma vez contido, as injeções podem ser administradas através do material plástico; um recipiente rígido de plástico é útil quando é necessário ter acesso à cauda.

Insira a rata conforme descrito pelo fabricante do dispositivo. Com este tipo de contenção, a rata é suavemente puxada para trás para dentro do dispositivo pela cauda. Coloque o fechamento na parte frontal do dispositivo e ajuste-o para limitar os movimentos do animal.

Se os animais parecerem agitados, pode-se utilizar o contenção com toalha ao colocá-la sobre o animal; a escuridão e a contenção suave proporcionadas pela toalha podem acalmar uma ratazana agitada. Coloque a toalha suavemente sobre a ratazana e, em seguida, segure-a cuidadosamente ao redor do corpo. Enrole a toalha ao redor da ratazana, certificando-se de não cobrir o nariz do animal.

Mova a toalha para que a parte do corpo destinada à injeção fique exposta. Antes de realizar qualquer uma das técnicas de administração a seguir, é benéfico praticar o manuseio da seringa. Idealmente, uma das mãos manipulará a seringa enquanto a outra imobiliza o animal. As agulhas devem ser inseridas no animal com o bisel voltado para cima, especialmente para injeções intravenosas.

Agulhas de calibre fino são facilmente danificadas ao serem inseridas nas tampas de frascos. Utilize um calibre maior para retirar os materiais e depois substitua por um calibre menor para a injeção. A administração intranasal é usada para alguns tipos de agentes infecciosos em estudos de alergia e asma, e em algumas pesquisas envolvendo os pulmões.

A administração intranasal não exige anestesia nem cirurgia, como ocorre com a instilação intra-traqueal. Para a administração intranasal, imobilize o animal conforme descrito anteriormente e, com uma seringa ou pipetador, coloque uma pequena quantidade do material a ser inalado nas narinas do animal. Observe se o material desaparece nas narinas e repita conforme necessário.

Os compostos são administrados por via intramuscular se exigirem absorção rápida e puderem ser administrados em volumes muito pequenos. A contenção para injeções intramusculares pode exigir duas pessoas, já que uma das patas traseiras deve ficar livre e estabilizada para a injeção. Insira a agulha perpendicularmente à pele sobre o músculo quadríceps ou a região lateral da coxa do animal.

Tenha cuidado para não injetar na massa muscular posterior, pois é possível danificar o nervo ciático. A administração intraperitoneal é escolhida quando há um grande volume de composto a ser administrado e quando é aceitável a taxa de absorção, aproximando-se à da administração oral.

Para realizar uma injeção intraperitoneal, imobilize o animal e oriente a ponta do nariz dele em direção ao chão. Para expor o abdômen, localize a linha média do animal e mentalmente divida o abdômen em quadrantes.

Escolha um local de injeção nos quadrantes inferiores, especialmente no quadrante inferior direito do animal. Utilize uma seringa e agulha de tamanho apropriado para injetar o material no animal. A administração subcutânea de uma substância é utilizada quando se deseja uma absorção lenta.

Camundongos e ratos possuem grande quantidade de pele solta, de modo que volumes relativamente maiores podem ser administrados por via subcutânea em comparação com humanos. Para injeções subcutâneas, imobilize levemente o animal conforme mostrado anteriormente. Segure a pele e puxe-a suavemente para cima.

Fazendo uma prega com uma seringa e agulha de tamanho apropriado, insira a agulha num ângulo de 30 a 45 graus na pele pregada e injete o material. Um pequeno inchaço sob a pele é o indicativo de uma injeção bem-sucedida. Se os animais forem manuseados rotineiramente após a injeção subcutânea, não utilize a nuca.

Em vez disso, utilize a pele na região dorsal do dorso. Se os animais devem receber múltiplas injeções subcutâneas, os locais de injeção devem ser alternados. A contenção dos animais durante a administração intradérmica pode ser difícil e exigir o uso de sedação química. Se um anestésico for utilizado, certifique-se de que ele não interfira com os objetivos da pesquisa.

Ao realizar uma injeção intradérmica, primeiro, remova os pelos do local da injeção para que a pele fique claramente visível no sítio de injeção. Insira uma agulha de tamanho apropriado na pele em um ângulo de 15 a 30 graus. Não insira a agulha muito profundamente.

Se inserida corretamente, a injeção deve encontrar resistência. Uma pequena bolha, que será mais pálida do que a pele ao redor, será visível caso a injeção tenha sido bem-sucedida. Aplique pressão suave para evitar o refluxo do material.

A administração intravascular é utilizada para uma grande variedade de compostos e é a via ideal quando o composto pode ser adequadamente formulado e quando se deseja um efeito muito rápido. Para uma injeção intravascular na veia lateral da cauda, imobilize o animal em um cone de decapitação ou em um dispositivo de contenção para roedores. Como demonstrado anteriormente, segure a cauda do animal pela ponta com a mão não dominante para esticar e girar. Um quarto de volta para posicionar as veias da cauda dorsalmente.

Identifique uma das duas veias laterais da cauda para a injeção, evitando a artéria ventral da cauda. Aproxime-se da porção distal da cauda com a agulha em um ângulo de 15 a 20 graus e injete o material. Uma injeção bem-sucedida fará com que o material entre na veia sem resistência e cause o embranquecimento da veia da cauda durante toda a duração da injeção.

Posicionar a injeção mais distalmente preserva uma porção intacta da veia que pode ser utilizada caso a primeira tentativa não seja bem-sucedida. A administração intragástrica ou por gavagem oral é realizada apenas em animais acordados e contidos, pois a anestesia ou sedação aumenta o risco de aspiração. Compostos cuja segurança está sendo testada para administração oral humana são frequentemente administrados dessa forma. Comece selecionando uma agulha de alimentação oral de tamanho apropriado.

O comprimento é determinado segurando o animal imobilizado em posição vertical e medindo a partir do canto da boca. A ponta esférica da agulha de alimentação deve alcançar a última costela do animal; imobilize o animal de modo que sua cabeça e seu corpo fiquem em uma linha reta vertical.

Isso alinha o esôfago, permitindo uma passagem mais fácil da agulha de alimentação. Insira a ponta esférica da agulha na boca do animal, posicionando-a sobre a língua. Uma vez que a agulha esteja no lugar, levante a agulha e a seringa suavemente, pressionando contra o palato, de modo que o nariz do animal fique voltado para o teto.

Pode ser necessário redirecionar ligeiramente a agulha ao passar pela parte posterior da garganta. Qualquer tensão na agulha indica a necessidade de ajustar a posição; continue avançando a agulha até alcançar a distância predeterminada. A agulha deve avançar com facilidade e o animal não deve ofegar nem engasgar ao administrar a substância.

Se houver resistência ou se o animal ofegar, engasgar ou ficar azul, pare imediatamente e remova a agulha. Uma vez dominadas, essas técnicas permitirão administrar doses com segurança tanto em ratos quanto em camundongos e contê-los eficazmente. Ao tentar esses procedimentos, é importante lembrar que um animal corretamente contido torna o procedimento seguro tanto para o animal quanto para o manipulador.

Não se esqueça de que trabalhar com animais na ciência é um privilégio e uma responsabilidade. Escolher o método correto de contenção e as vias apropriadas de administração é boa ciência e boa prática de bem-estar animal.