Name: Monitoramento metástases tumorais e lesões osteolíticas com bioluminescência e CT Micro Imagem (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Aprenda a monitorar metástases tumorais e lesões osteolíticas em modelo murino usando bioluminescência e micro CT. Esta técnica combina imagem funcional e anatômica para análise longitudinal da progressão da doença óssea.

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Imagem longitudinal é usada em estudos pré-clínicos para acompanhar o progresso de uma doença ou medir o efeito de uma terapêutica. Em oncologia, métodos ópticos fornecem ferramentas rigorosa para monitorar o crescimento do tumor e entregar quantificação precisa do crescimento celular ou a expressão de genes em cada momento em tal estudo. Alterações anatômicas pode ser medida utilizando uma técnica de alta resolução, como microCT, mas para imagens longitudinal uma dose de raios-X de baixa deve ser usado para evitar artefatos biológicos. Imagens ópticas e microCT pode ser co-registrados para fornecer uma combinação de dados anatômicos e funcionais garantir que o máximo de informação é extraída do modelo animal. 1. Preparação celular <ol><li> Caliper fornece uma gama de luciferase linhas expressando câncer de células para pesquisa pré-clínica em modelos de mouse. </li><li> MDA-MB-231-luc-D2H2LN é uma linha de células mamárias humanas tumor expressando o gene da luciferase, que pode ser usado como um indicador óptico de tumorgenesis in vivo. Esta linhagem celular é criado a partir de uma metástase ganglionar espontânea que se originou a partir de um tumor mamário pad D3H1 gordura e é conhecido de forma agressiva formar metástases. </li><li> As células são fornecidos como uma cultura isentos de agentes patogénicos congelados que prontamente cresce em mídia padrão sem a necessidade de marcadores de seleção. </li><li> Para verificar a atividade luciferase antes da injeção no animal um frasco de 90% confluentes é colhido por tripsinização. Atividade de luciferase é medido por dispensar 50.000 células em uma placa de microtitulação e execução de diluição serial. </li></ol> 2. Intracardíaca injeção de células em animais <ol><li> Antes da injeção, os animais são anestesiados com isoflurano 3%. </li><li> 1-3000000 células são injetadas no volume 50uL para o ventrículo esquerdo. Suspensão de células contém 150ug/ml D-Luciferina para validar a técnica de injecção. </li><li> Para confirmar uma injeção de ratos correta intracardíacas são gravadas no sistema IVIS. Ratos que mostram sinal de BLI por todo o corpo ter sido injetado corretamente. Se o sinal está localizada as células não foram injetados corretamente no coração. </li></ol> 3. BLI imagem para monitorar metástases <ol><li> O shuttle imaging suporta o mouse para captura de dados em ambos os Spectrum IVIS eo QuantumFX sistema microCT. </li><li> O ônibus ajuda a manter o animal na mesma posição para imagens e incorpora sinais fiducial para ajudar na automática co-registro. A câmara é ligada ao vaporizador isofluorance para manter a anestesia. </li><li> Assistente de imagem no software Image Vivendo 4.1 pode ser usado para selecionar automaticamente o tempo de exposição, f-stop e binning e garantir a coleta de dados quantitativos. </li><li> Várias imagens podem ser adquiridos e comparados em estudos longitudinais que cobrem segundos ou meses, dependendo da natureza do experimento. </li><li> Dia pós-injeção de células 6, BLI imagem com IVIS Spectrum mostra metástases para o osso em sete dos nove camundongos. </li></ol> 4. Acompanhamento longitudinal de lesões osteolíticas usando micro CT <ol><li> Os ratos que mostraram metástases ósseas claro e visível usando BLI foram fotografadas no micro FX Quantum sistema de CT. </li><li> O Quantum FX micro sistema de CT fornece imagens de alta qualidade a uma dose de raios-X de baixa o suficiente para permitir verdadeira longitudinal micro CT em estudos pré-clínicos. </li><li> Degradação óssea em ambas as pernas podem ser monitorados longitudinalmente usando este sistema em menos de um minuto. </li><li> Os ratos são anestesiados com isoflurano 3% e podem ser transferidos diretamente do sistema Spectrum IVIS. </li><li> Duas imagens de 60 milímetros são costuradas juntas para capturar o ponto de vista animal inteiro. </li><li> A FOV 30mm é ideal para imagens de joelho em alta resolução. </li><li> A única digitalização com resolução alta o suficiente para medir e quantificar metástases ósseas leva apenas 18 segundos e oferece uma dose de apenas 13mGy. </li><li> Camundongos foram fotografadas até 8 vezes em 36 dias com o sistema de CT micro, sem afetar o crescimento do tumor ou a saúde do animal. </li><li> O micro tomografia computadorizada mostrou que leisions óssea foram visíveis no dia 10 e progrediu muito rapidamente, o que corresponde ao aumento do sinal de BLI. </li></ol> 5. 3D co-registro e análise de BLI e UCT <ol><li> Uma vez que as imagens foram capturadas em ambos o espectro IVIS e FX Quantum micro dados CT sistema pode ser co-registrados em uma reconstrução 3D. </li><li> MicroCT imagens são exportadas como arquivos DICOM e carregado na ferramenta imagem viva modalidade 4,1 3D Multi. </li><li> No Software imagem viva executar o programa DLIT a três dimensões reconstruir o sinal óptico. </li><li> A ferramenta de referência no software é usado para co-registrar o sinal de BLI óptica para a imagem CT micro. </li><li> Conjuntos de co-registrados os dados podem ser analisados ​​quantitativamente para monitorar vários parâmetros durante a progressão da doença aqui estamos acompanhando o crescimento do tumor metastático juntamente com o desenvolvimento da lesão osteolítica no osso. </li> &lt;/ Ol&gt;

<ol><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+Human+Breast+Cancer+Cell+Lines+that+Permit+Rapid+and+Sensitive+in+vivo+Detection+of+Mammary+Tumors+and+Multiple+Metastases+in+Immune+Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent Human Breast Cancer Cell Lines that Permit Rapid and Sensitive in vivo Detection of Mammary Tumors and Multiple Metastases in Immune Deficient Mice.</a> Breast Cancer Research. 7, R444-R454 (2005).</li>
<li>Cowey, S., Szafran, A. A., Kappes, J., Zinn, K. R., Siegal, G. P., Desmond, R. A., Kim, H., Evans, L., Hardy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+Cancer+Metastasis+to+Bone%3A+Evaluation+of+Bioluminescent+Imaging+and+MicroSPECT%2FCT+for+Detecting+Bone+Metastasis+in+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Breast Cancer Metastasis to Bone: Evaluation of Bioluminescent Imaging and MicroSPECT/CT for Detecting Bone Metastasis in Immunodeficient Mice.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 24, 389-401 (2007).</li>
<li>Labrinidis, A., Hay, S., Liapis, V., Ponomarev, V., Findlay, D. M., Evdokiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zoledronic+Acid+Inhibits+Both+the+Osteolytic+and+Osteoblastic+Components+of+Osteosarcoma+Lesions+in+a+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Zoledronic Acid Inhibits Both the Osteolytic and Osteoblastic Components of Osteosarcoma Lesions in a Mouse Model.</a> Clinical Cancer Research. 15, (2009).</li>
<li>Kaijzel, E. L., Pluijm, G. vander, Lowik, C. W. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-Body+Optical+Imaging+in+Animal+Models+to+Assess+Cancer+Development+and+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Whole-Body Optical Imaging in Animal Models to Assess Cancer Development and Progression.</a> Clinical Cancer Research. 13, 3490-3497 (2007).</li>
<li>Minn, A. J., Kang, Y., Serganova, I., Gupta, G. P., Giri, D. D., Doubrovin, M., Ponomarev, V., Gerald, W. L., Blasberg, R., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Organ-Specific+Metastatic+Potential+of+Individual+Breast+Cancer+Cells+and+Primary+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Distinct Organ-Specific Metastatic Potential of Individual Breast Cancer Cells and Primary Tumors.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115, (2005).</li>
<li>Xu, H., Christensen, A., Kuo, C., Nilson, D., Lim, E., Whalen, J., Kim, J. B., Zhang, N., Singh, R., Oldfield, S., Troy, T., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-registration+of+in+vivo+Optical+Tomography+and+Micro-CT+for+Longitudinal+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Word+Molecular+Imaging+Congress%22%5BJournal%5D)">Co-registration of in vivo Optical Tomography and Micro-CT for Longitudinal Studies.</a> Word Molecular Imaging Congress. , (2010).</li>
</ol>

Os autores são funcionários da Caliper Life Sciences que fazem o instrumento apresentado neste artigo.

Imagem de pequenos animais com microCT tem sido aplicada ao monitoramento lesões osteolíticas em condições patológicas, como o desenvolvimento do tumor (Cowey et al 2007;.. Labrinidis et al, 2009). Como imagem de bioluminescência de luciferase tumores marcada tem sido amplamente adotado pré-clínica, co-registro de imagens bioluminescência e microCT proporcionou uma melhor definição da localização anatômica dos sinais de bioluminescência (Kaijzel et al. 2007). Estudo anterior com um rótulo de linha de mama luciferase das células tumorais MDA-MB-231-luc-D3H2LN mostrou metástases para osso e desenvolvimento de lesões osteolíticas seguintes injeção intra-cardíaca (Jenkins et al 2005;. Minn et al, 2005). Neste estudo, exploramos um estudo longitudinal de metástases do tumor e atividade osteolítica com combinatória óptica e baixa dose de radiação de imagens microCT com o modelo de metástase sistêmica MDA-MB-231-luc-D3H2LN. Realizamos imagem seqüencial com IVIS Spectrum e FX Quantum microCT sistemas e bioluminescência alcançados e CT co-registro com a nossa imagem viva recentemente desenvolvido 4,1 software (Heng et al., 2010). Imagem de bioluminescência com IVIS fornece não-invasivo de detecção das células tumorais com alta sensibilidade, permitindo que os tumores para ser detectado em fase inicial. Imagem com Quantum FX permite a reconstrução 3D preciso das lesões ósseas e informações anatômicas detalhadas. Quantum FX sistema oferece imagem baixa dose de radiação, que permite o monitoramento longitudinal da progressão da doença. Correlação de lesões ósseas e metástases tumorais foi representado na imagem co-registrados, ea vantagem de rastreamento multimodalidade de desenvolvimento da lesão longitudinal foi claramente demonstrado.

monitoramento metástases tumorais e lesões osteolíticas com bioluminescência e ct micro imagem

Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Entrega intracardíaca seguintes MDA-MB-231-luc-D3H2LN células para Nu / Nu camundongos, metástases sistêmicas desenvolveram nos animais injetados. Imagem de bioluminescência usando Spectrum IVIS foi empregado para monitorar a distribuição e desenvolvimento das células tumorais após o procedimento de entrega, incluindo a reconstrução DLIT para medir o sinal de tumor e sua localização. Desenvolvimento de lesões metastáticas para os tecidos ósseos desencadeia a atividade osteolítica e lesões à tíbia e fêmur foram avaliados longitudinalmente usando micro CT. De imagem foi realizado utilizando um sistema de micro Quantum FX CT com imagens rápidas e dose de raios-X de baixa. A baixa dose de radiação permite múltiplas sessões de imagem a ser realizada com uma dosagem de raios-X cumulativo muito abaixo LD50. Um rato dispositivo de transporte de imagens foi usado para seqüencialmente imagem os ratos com ambos IVIS Spectrum e FX Quantum alcançar o posicionamento exato de animais em ambos os bioluminescência e imagens de TC. O óptico e define CT dados foram co-registradas em 3-dimentions usando a imagem viva 4,1 software. Esta abordagem multi-modo permite acompanhar de perto o crescimento do tumor e do desenvolvimento simultâneo com a atividade osteolítica.

Um modelo de camundongo experimental de metástase óssea foi estabelecido após a entrega intracardíaca da luciferase expressando células tumorais mamárias. Desenvolvimento do tumor e resultou lesão osteolítica foram monitorados longitudinalmente, com a bioluminescência e CT micro imagem.

Monitoramento metástases tumorais e lesões osteolíticas com bioluminescência e CT Micro Imagem

Após a administração intracardíaca de células MDA-MB-231-luc-D3H2LN em camundongos Nu/Nu, desenvolveram-se metástases sistêmicas nos animais injetados. A bioluminescência...

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