Procedimento de punção cecal Ligadura

Olá, meu nome é Miguel Toscano, do laboratório do Dr. Dena no departamento de Microbiologia e Hemologia da Temple University. Hoje vamos mostrar como configurar o modelo de alegação e punção iCal na cepa C 57 Black Seas Mouse. Usamos esse modelo em nosso laboratório para imitar a sepse humana.

Basicamente, esse modelo consiste em uma punção do sêmen que permite a liberação de material fecal na cavidade peritoneal para produzir uma sepse polimicrobiana, gerando assim uma resposta imune exacerbada. Neste modelo, muitos órgãos e diferentes tipos de células são irreversivelmente danificados. Que no final pode causar a morte do animal.

Então, vamos começar. Anestesiando o mouse. O primeiro passo é anestesiar o animal por injeção intraperitoneal.

Uma mistura, um para um, de cetomina e xilazina. Para evitar ser mordido pelo rato, para evitar machucá-lo, devemos agarrar o rato pela cauda com uma mão. Com a outra mão, pressionamos de volta contra o chão.

Então podemos pegar o rato pela parte de trás da cabeça e virar o animal de costas para expor o abdômen. Com uma seringa de insulina de calibre 29, injetamos de 20 a 30 microlitros da anestesia na cavidade peritoneal. Preparando o mouse para o procedimento, pegue a parte de trás do mouse e raspe seu abdômen pressionando a cauda e / ou a perna do mouse.

Verificamos se o mouse não é sensível à dor, então o abdômen é desinfetado. Primeiro esfregando com a solução de Betadine, seguido de limpeza com um lenço umedecido com álcool isopropílico por pelo menos um minuto. Praticando a laparotomia Para praticar uma laparotomia, levantamos a pele no meio do abdômen com a pinça e fazendo uma pequena incisão de cerca de um centímetro de comprimento.

Em seguida, levante o períneo e pratique outra pequena incisão para expor a cavidade peritoneal. Usando uma pinça curva, segure a membrana peritoneal. Identifique e exponha o ceco passando-o através da membrana peritoneal.

Coloque-o sobre o abdômen. Agora é o momento da ligadura. Este é um fator importante.

Para determinar a gravidade do modelo, podemos modular a gravidade do procedimento. Com a extensão da ligadura, os camundongos desenvolverão uma sepse mais leve. Se a ligadura for feita mais perto do final do ceco, uma sepse de grau médio se feita no meio e uma sepse grave se feita mais perto da válvula ileocecal, a gravidade do procedimento será refletida pela porcentagem de mortalidade.

Nunca ligue a válvula ileocecal. Agora faça a ligadura usando sutura de seda com nó duplo para apertá-la, fazendo a punção Segure o ceco e faça cuidadosamente uma punção perto do local da ligadura e faça outra punção mais perto do final do ceco. A membrana do secum é macia e será perfurada com muita facilidade.

Usando agulhas com espessuras diferentes e fazendo uma ou duas perfurações, também podemos modular a gravidade do modelo. O método de punção simples ou dupla mostrado aqui é uma técnica alternativa à punção clássica de sequela. A vantagem de usar o método de punção simples ou dupla é que se pode controlar melhor a quantidade de fezes expulsas quando se procura espremir.

Segure o secum com os dois dedos e expulse suavemente o ceco para extrair uma quantidade muito pequena de fezes. Fechando a laparotomia, Em seguida, levante o peritônio e coloque cuidadosamente de volta o ceco. Na cavidade peritoneal.

Tenha muito cuidado para evitar picadas acidentais do ceco Com a pinça, recomenda-se o uso de pinças maiores. Agora é a hora Fechar a cavidade peritoneal. Usando sutura de seda, é muito importante que você se certifique de que está muito bem fechado.

Começamos de um lado da ferida onde fazemos um nó. Continue fazendo a sutura até o outro lado, passando a seda sob o laço da punção anterior. Para fechar a pele, podemos usar clipes de ferida de Mitchell ou clipes de reflexo usando a ferramenta certa para fechar os clipes.

Coloque quantos clipes forem necessários para garantir que a ferida esteja fechada. Ressuscite os camundongos injetando por via subcutânea, um mililitro de solução salina pré-quente. Usando uma agulha de calibre 25, esta medida de ressuscitação fluídica induzirá a fase hiperdinâmica da sepse, finalizando o procedimento.

Coloque o mouse sob uma luz de aquecimento infravermelho ou, alternativamente, sobre uma almofada de aquecimento até que o mouse se recupere da anestesia. Forneça comida e água no chão da gaiola e supervisione os animais a cada oito a 12 horas em busca de sinais de doença. Injete buprenorfina por via subcutânea para analgesia pós-operatória.

Um analgésico diferente para usar é o T.Tramadol. Sinais de sepse, sintomas de sepse são febre, letargia, pelo, ereção, diarréia, amontoamento e mal-estar. Animais muito doentes apresentam uma diminuição severa da temperatura corporal e mal se movem para evitar o sofrimento.

Eles devem ser sacrificados nesta fase H.So é assim que realizamos a ligadura falciforme e o modelo pontual. Espero que você tenha gostado da demonstração deste procedimento e o tenha achado muito útil para sua pesquisa antes de iniciar seu estudo com animais. Recomendamos fortemente que você use mentes velhas ou não utilizadas para treinamento, a fim de estabelecer o grau apropriado de gravidade para seus experimentos, modificando o comprimento da ligadura, a espessura da agulha e o número de perfurações.

Com isso dito, adeus.