Necropsia de diagnóstico e coleta de tecido e amostra selecionada em ratos e camundongos

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma necropsia básica de roedores. Isso é feito registrando primeiro as informações básicas sobre o animal. A segunda etapa do procedimento é examinar as vísceras.

O terceiro passo é coletar amostras como órgãos ou linfonodos mesentéricos. Em última análise, o estado de saúde de um animal pode ser determinado por meio de histopatologia ou outras técnicas. Geralmente, as pessoas novas na realização de uma necropsia terão dificuldades porque as anatomias de roedores aprenderam no trabalho.

Esses métodos podem ajudar a responder a perguntas-chave sobre a saúde dos animais em uma colônia de pesquisa. A demonstração visual dessas técnicas é essencial, pois leva tempo para aprender a localização de vários tecidos e como identificar o normal do anormal. Antes de sacrificar o animal, colete informações sobre sua história e registre suas características atuais, como condição física, comportamento, sexo, idade, peso, tensão e assim por diante.

Este registro é uma idade vital para a pessoa que examinará os tecidos antes de sacrificar o animal. Certifique-se de que seja usado equipamento de proteção individual adequado. Prepare uma dissecação, pinça de tábua, tesoura, etiquetas para recipientes, fixador, mídia e recipientes de coleta.

Depois de sacrificar o animal, avalie sua condição corporal, verifique se há anormalidades na pele e na pelagem, emagrecimento e desidratação. Procure também evidências de manipulações artificiais, implantes ou cicatrizes cirúrgicas no animal. Em seguida, usando um microscópio de dissecação, examine todos os orifícios externos em detalhes.

Isso inclui orelhas, olhos, nariz, boca, ânus e genitália. Agora, deite o animal de costas na tábua de dissecação, levante sua pele com uma pinça e use uma tesoura para cortar a pele do ânus ao queixo. Em seguida, reflita a pele para os lados e corte a parede abdominal e a caixa torácica.

Exponha as vísceras torácicas fazendo dois cortes lateralmente de cada lado da caixa torácica. Corte o diafragma. Em seguida, remova a caixa torácica cortando a parte superior do esterno.

Agora, examine os órgãos torácicos e abdominais expostos. Conheça quaisquer mudanças de cor, odores incomuns, tamanho, diferenças e órgãos ausentes ou deslocados. Examine a consistência das superfícies dos órgãos e observe quaisquer massas de tecido ou bolsas cheias de líquido.

Além disso, observe a presença de fluido em qualquer cavidade. Continue o exame com o trato gastrointestinal. Examine o mesentério em busca de linfonodos aumentados ou massas de tecido.

Descreva o conteúdo do trato gastrointestinal e verifique cuidadosamente se há paredes espessas, massas ou hemorragia. Para examinar o interior dos rins, use uma lâmina para fazer uma seção longitudinal do rim esquerdo e uma seção transversal do rim direito fora do centro da linha média. Verifique se há anormalidades no parênquima.

Agora inspecione o sistema urogenital nos homens. Identifique as vesículas seminais, os testículos, o epidídimo, os ureteres e as glândulas de leitura nas mulheres. Identifique o útero, os ovários e os ureteres.

Examine o sistema urogenital em busca de bloqueios, bolsas de fluido, hemorragia ou outras anormalidades. Depois de concluir esses exames, isole e excise os órgãos-alvo para um exame mais aprofundado. Normalmente, o coração, o fígado, os rins e o baço são coletados à medida que são excisados.

Mergulhe cada órgão em um fixador ou siga os primeiros passos de um protocolo que exija esses tecidos, como congelamento ou imuno-histoquímica, para obter uma fixação adequada. Geralmente, os tecidos são submersos em um conservante como 10% NBF na proporção de 20 volumes de fixador para um volume de tecido. Ao trabalhar com ratos, colete o aspirado brônquico antes do aspirado nasal.

Comece refletindo a pele nos tecidos subcutâneos longe da área cervical, expondo assim as glândulas salivares e a musculatura cervical. Em seguida, remova esses tecidos para expor a traqueia. Faça uma incisão de três milímetros na traqueia e insira uma pipeta carregada com um mililitro de fluido de amostragem no lúmen traqueal direcionado trimestralmente.

Lave lentamente o fluido de amostragem através da traqueia e nos pulmões três vezes. Em seguida, retire o fluido de amostragem e remova a pipeta da traqueia. Nem todo o fluido retornará para a pipeta.

Portanto, repita o processo se for necessário mais fluido. Para testes em camundongos. Para coletar uma amostra de aspirado nasal ou aspirado brônquico, acesse a ATU faríngea nasal usando uma tesoura esterilizada.

Corte a articulação mandibular temporal e reflita a mandíbula para longe da maxila, expondo o atu faríngeo nasal para coletar o aspirado nasal. Insira uma pipeta carregada com um mililitro de fluido de amostragem no atu faríngeo nasal do camundongo ou no lúmen traqueal do rato. A pipeta deve ser direcionada para cran e empurrada para dentro.

Assim, a ponta entra em contato com o palato nasal. Uma vez lá, injete lentamente o fluido de amostragem. À medida que o fluido entra na cavidade nasal, ele formará meniscos no orifício nasal e também deve ser visível através do palato oral translúcido.

No entanto, se o fluido sair pela boca, reoriente a pipeta. Uma vez totalmente injetado, retire o fluido de amostragem da cavidade nasal para a pipeta e, em seguida, remova a pipeta. Comece segurando a traqueia com uma pinça e corte-a logo acima da pinça.

Em seguida, puxe suavemente a traqueia para cima, cortando as conexões dos tecidos até que todo o conjunto de tecidos torácicos possa ser excisado. Agora, coloque os pulmões na superfície de trabalho e amarre frouxamente um pedaço de sutura ou barbante ao redor da traqueia. Não aperte o nó, ou você não conseguirá passar a agulha para a traqueia.

Agora, encha uma seringa com fixador e insira a agulha na abertura da traqueia enquanto prende a traqueia à agulha. Com uma pinça, encha lentamente os pulmões com fixador até que estejam totalmente inflados. O volume do fixador varia de acordo com a idade, cepa e saúde do animal.

Se os tecidos subinflados parecerem planos, se estiverem superinflados, o líquido espumoso vazará do tecido uma vez preenchido, aperte o material de sutura ou corda ao redor da traqueia para evitar o refluxo do fixador para fora dos pulmões. Em seguida, coloque os pulmões inflados no fixador. Coloque a carcaça em uma placa de dissecção limpa em decúbito ventral e use uma tesoura e uma pinça para remover a pele e o músculo que recobre a panturrilha.

Em seguida, decapite a carcaça usando uma tesoura pequena. Insira a lâmina inferior no forame magno e corte a linha média da panturrilha usando um movimento para cima. Agora, exponha o cérebro com uma pinça abrindo a panturrilha.

Se o patologista preferir cortar seções do cérebro enquanto estiver no crânio, coloque imediatamente o crânio com o cérebro exposto em 10% NBF. Caso contrário, segure a cabeça ao redor do nariz com uma pinça ou dedos e inverta suavemente o crânio para que a gravidade ajude o tecido a cair do crânio. Cuidadosamente. Deslize a curva com pinças ao longo da borda externa do cérebro, começando nos lobos olfatórios.

Continue deslizando a pinça ao longo do crânio em direção ao cerebelo, enquanto aperta suavemente os nervos com a mesma pinça. Quando o cérebro libera o lugar no fixador, para localizar os gânglios linfáticos mesentéricos primeiro, localize o grande secum em forma de comunicação do intestino. Os linfonodos mesentéricos são os nódulos amarelos ovóides ou esféricos de tecido no mesentério adjacentes ao ceco.

Eles geralmente são um pouco mais grossos e de textura mais firme do que o mesentério e a gordura circundantes. Um escopo de dissecação pode ser útil para diferenciar tecidos no início, mas com a experiência não será necessário. Usando fórceps e tesouras, isole os linfonodos mesentéricos e transfira-os para um tubo de armazenamento para ser usado para cultura, PCR ou histopatologia.

Após a conclusão do protocolo, o seguinte está disponível para um patologista ou cientista, um relatório escrito da condição objetiva e subjetiva na eutanásia. Uma descrição objetiva dos tecidos antes de sua fixação, todos os principais órgãos abdominais e torácicos em fixador, o cérebro e os linfonodos mesentéricos e amostras de aspirado nasal e brônquico. Uma vez dominada, uma necropsia abreviada pode levar menos de 30 minutos.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar de registrar suas observações sobre a condição do animal e seus tecidos. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar uma necropsia completa de roedores, incluindo a coleta de pulmões perfundidos, linfonodos mesentéricos e o cérebro.