Preparação de organoides a partir de tumores: um modelo de tumor 3D in vitro

Pique o tecido tumoral em pequenos pedaços. Transfira as peças para um tubo com tampão de digestão. As fibras de colágeno ao redor das células são quebradas, degradando a matriz do tecido. Em seguida, pelete os pedaços digeridos e descarte a maior parte do tampão de digestão. Agite o tubo para quebrar o pellet.

A solução agora consiste em aglomerados de células de vários tamanhos. Ressuspenda os aglomerados de células em uma solução de tripsina e um inibidor de ROCK. A tripsina continua quebrando o tumor e o inibidor previne a morte celular. Em intervalos regulares, pipetar a solução para quebrar os aglomerados e dispersar as células. Em seguida, ressuspenda as células em solução de matriz na concentração apropriada.

Coloque gotas da solução em uma placa de cultura para formar cúpulas de matriz. Coloque as placas de cabeça para baixo em uma incubadora e deixe a matriz solidificar completamente. Em seguida, adicione meios de cultura de células e incube, com o lado direito para cima. A matriz fornece um andaime para suportar o crescimento tridimensional do organoide.

Após picar, coloque os pedaços do tumor em um tubo de 15 mililitros de tampão de digestão por 1,5 a 2 horas de digestã