Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:53 min. • April 30th, 2023
Os receptores de folato são glicoproteínas associadas à membrana superexpressas pela maioria das células cancerígenas do ovário. A exploração desses receptores permite a entrega direcionada de nanopartículas diagnósticas nas células cancerígenas.
Comece com uma suspensão dos conjugados de agente de contraste de nanopartículas com tampa de ácido fólico desejados. Adicione esta suspensão de nanopartículas em uma cultura aderente de células de câncer de ovário. Incube a cultura pelo período de tempo desejado.
O ácido fólico funcionalizado para as nanopartículas ajuda a reconhecer os receptores de folato expressos nas células cancerígenas, promovendo a ligação seletiva dos conjugados de nanopartículas com as células. Posteriormente, a membrana plasmática invagina, facilitando a captação celular e o acúmulo de nanopartículas.
Colha as células cancerígenas. Em seguida, centrifugue para separar as células do sobrenadante contendo quaisquer nanopartículas não ligadas. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células contendo nanopartículas num tampão adequado para aplicações a jusante.
Primeiro, misture as nanopartículas de sulfeto de cobre com tampa de ácido fólico na concentração adequada em meio RPMI fresco. Adicione esta solução de nanopartículas a cada poço da placa preparada de 24 poços que contém células SKOV-3 a uma concentração de 400 microgramas por mililitro. Incube a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por duas horas.
Depois disso, tripsinize as células com 0,5 mililitros de tripsina a 0,25% e EDTA. Para neutralizar a tripsina, adicione pelo menos 1 mililitro de meio de crescimento completo RPMI 1640 sem ácido fólico e centrifugue as células a 123 x g por seis minutos. Para lavar as células, remova o sobrenadante.
Ressuspenda as células em 2 mililitros de PBS e centrifugue a 123 x g por seis minutos. Repita esta etapa de lavagem duas vezes para remover quaisquer nanopartículas não ligadas.
Em seguida, ressuspenda as células com 1 a 2 mililitros de uma solução de Tween a 2% em PBS. Conte as células usando um hemocitômetro e Trypan Blue. Diluir as células em uma solução de 2% de Tween e PBS até a concentração escolhida para detecção.