Isolamento mitocondrial: uma técnica para isolar mitocôndrias de amostra de tecido de câncer de ovário humano

As mitocôndrias, as organelas citoplasmáticas conhecidas como usinas de energia da célula, sofrem mudanças estruturais e funcionais drásticas durante a progressão do câncer.

Para isolar as mitocôndrias, pegue o tecido canceroso limpo em um prato de vidro e pique-o em pedaços pequenos. Transfira os pedaços para um tubo contendo tampão de isolamento mitocondrial. Homogeneizar a amostra para romper as células e liberar seu conteúdo, incluindo as organelas.

Centrifugue a mistura em velocidade baixa. Isso peletiza os componentes mais densos, como núcleos, detritos de tecido e quaisquer células intactas, deixando componentes menos densos, como mitocôndrias, microssomas, peroxissomos e lisossomos no sobrenadante. Recolha o sobrenadante e centrifugue a alta velocidade. Os microssomas, sendo relativamente mais leves, permanecem no sobrenadante, enquanto a fração bruta contendo mitocôndrias se peletiza na parte inferior.

Remover o sobrenadante e ressuspender o sedimento num meio de gradiente de densidade adequado. Configure um gradiente de densidade descontínuo colocando a fração mitocondrial bruta em diferentes meios de densidade, organizando-os em ordem decrescente de densidades de baixo p