JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
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Para começar, prepare uma coelha anestesiada na posição dorsal. Faça uma incisão cirúrgica através de sua parede abdominal para expor a cavidade abdominal. Localize os chifres uterinos. Essas estruturas tubulares são análogas a dois úteros distintos que se estendem das trompas de Falópio e se abrem em dois colos do útero separados em ambos os lados. Amarre cirurgicamente os cornos uterinos de ambos os lados em um local mais próximo dos colos do útero para isolar as regiões do corno uterino distal.
Agora, injete uma suspensão de células tumorais desejada altamente metastizante no miométrio ou na camada muscular externa do útero em um ponto entre o local da sutura e o colo do útero. Coloque os chifres uterinos de volta no abdômen. Feche a incisão e deixe o coelho se recuperar. Poucos dias após a injeção, um tumor se desenvolve no local da injeção. As células desse tumor, com alto potencial metastático, podem viajar pelo sistema linfático e extravasar para os linfonodos, resultando em metástases linfonodais.
Use uma lâmina de bisturi número 11 para fazer uma incisão de 2,5 centímetros, 1 centímetro cranial à sínfise púbica através da pele e do tecido subcutâneo. Incise a fáscia do reto e disseque os músculos retos lateralmente para expor o peritônio subjacente. Confirme se a superfície inferior está livre de intestinos ou outros órgãos abdominais. Entre bruscamente no peritônio para identificar a bexiga urinária e passe um dedo enluvado superior, posterior e lateralmente sobre o ápice da bexiga para localizar os cornos uterinos.
Extraia os cornos uterinos através da incisão abdominal para descansar na parede abdominal. Use uma sutura absorvível trançada 3-0 para realizar uma única ligadura de sutura de cada corno uterino, aproximadamente 1,5 a 2 centímetros distal aos colos do útero e medial às artérias uterinas. Em seguida, amarre as suturas confortavelmente para ocluir os cornos uterinos distais.
Para inocular o miométrio com a suspensão de células VX2 previamente preparada, carregue uma seringa de 1 mililitro equipada com uma agulha de calibre 27 com 1 mililitro de células. Injete lentamente 0,5 mililitros da suspensão celular durante 1 minuto em cada corno uterino proximal ao local da sutura entre a sutura e o colo do útero. Em seguida, aplique pressão no local da injeção do miométrio por 30 segundos para minimizar o vazamento de células. Inspecione os locais de injeção e sutura quanto à hemostasia antes de colocar os cornos uterinos de volta no abdômen.