Isolamento de células mesoteliais: uma técnica para isolar células mesoteliais primárias de espécimes de tecido de omento humano

As células mesoteliais primárias humanas, ou HPMCs, revestem muitos órgãos viscerais, como o omento ou a camada de tecido adiposo presente na cavidade peritoneal.

Para isolar as células mesoteliais, comece imergindo uma amostra de omento humano em um tampão adequado para remover o excesso de glóbulos vermelhos ou hemácias. Em seguida, coloque o omento em um prato de vidro e pique-o em pedaços. Isso dissocia o tecido, liberando HPMCs junto com as hemácias contaminantes.

Transfira as peças para um tubo cônico e deixe-as paradas pelo tempo desejado. O tecido picado rico em gordura de baixa densidade sobe para o topo, enquanto os componentes celulares densos se depositam na parte inferior. Em seguida, aspire o líquido no fundo, contendo HPMCs e RBCs, em um tubo novo.

Centrifugue para coletar as células. Remova o sobrenadante contendo buffer. Ressuspenda o pellet em um meio de crescimento mesotelial e incube pela duração desejada. A mídia facilita o crescimento seletivo de HPMCs sobre hemácias.

Observe as células usando um microscópio óptico para confirmar o crescimento de células mesoteliais humanas em forma cuboidal.

Após a aquisição de uma amostra cirúrgica de omento humano, mergulhe