Ensaio de depuração mesotelial: uma técnica in vitro para quantificar a capacidade de invasão de esferoides de câncer de ovário em monocamadas de células mesoteliais

0 vistas4:34 min • April 30th, 2023

Durante a metástase do câncer de ovário, as células malignas se desprendem do local do tumor primário e começam a circular dentro da cavidade peritoneal. Essas células podem então formar aglomerados ou esferóides que aderem à monocamada de células mesoteliais que reveste a cavidade peritoneal. À medida que o tumor cresce, ele limpa as células mesoteliais subjacentes para facilitar a invasão.

Para modelar a depuração mesotelial, comece semeando células mesoteliais que expressam proteína fluorescente verde ou GFP em uma placa de cultura com fundo de vidro revestida com fibronectina. O revestimento de fibronectina fornece uma matriz que promove a fixação celular. Incube o prato para permitir que as células mesoteliais se espalhem e formem uma monocamada.

Em seguida, transfira uma suspensão de esferóides de células cancerígenas de ovário expressando proteína fluorescente vermelha para a monocamada mesotelial. Visualize a cultura por um período prolongado usando microscopia de fluorescência de lapso de tempo. Os esferóides vermelho-fluorescentes se estabelecerão e se ligarão à monocamada mesotelial verde-fluorescente.

As células cancerígenas exercem força sobre as células mesoteliais, interrompendo as junções celulares e alterando a integridade da camada mesotelial. A força também desloca as células mesoteliais subjacentes, gerando um buraco. Escolha uma configuração de filtro GFP apropriada para visualizar o orifício resultante como um espaço preto na imagem. Meça o espaço para quantificar a extensão da depuração mesotelial.

Para iniciar este procedimento, pré-cubra os poços de uma placa MatTek com fundo de vidro de 6 poços com fibronectina. Adicione 2 mililitros de solução de fibronectina / PBS a cada poço do prato e incube em temperatura ambiente por 30 minutos. As células mesoteliais que expressam proteínas fluorescentes verdes, para formar uma monocamada de células mesoteliais, são cultivadas em meio base a 10%. Tripsinize uma placa de células mesoteliais e gire em uma centrífuga de mesa a 900 RPM por três minutos.

Aspire o sobrenadante e ressuspenda as células em meio base a 10%. Ajuste para a concentração desejada com 10% de meio base. Quando a incubação de fibronectina de 30 minutos da placa MatTek estiver concluída, lave os poços com 2 mililitros de PBS. Aspire o PBS e coloque 6 vezes 10 até as quintas células mesoteliais por poço em cada poço do prato MatTek de 6 poços. Incube a placa MatTek em uma incubadora de cultura de células a 37 graus Celsius durante a noite para permitir que as células mesoteliais se fixem à placa e formem uma monocamada.

Use uma pipeta para coletar os esferoides do câncer de ovário da placa revestida com poli-HEMA de 96 poços. Aspire o meio de um poço da placa MatTek de 6 poços contendo uma monocamada de células mesoteliais. Lave uma vez com 2 mililitros de PBS. Adicione todos os esferóides da placa de 96 poços a um poço da placa MatTek. Isso é aproximadamente três vezes o número de esferóides que serão fotografados para contabilizar os esferóides que pousam na parte do prato que não pode ser fotografada.

Como queremos criar imagens de apenas um esferóide por campo de visão, a agregação dos esferóides deve ser evitada. Balance o prato suavemente de um lado para o outro para distribuir os esferóides uniformemente pela monocamada antes de se prenderem.

Coloque a antena MatTek no palco de um microscópio de fluorescência de campo amplo invertido capaz de realizar imagens de lapso de tempo por pelo menos oito horas. Use um estágio motorizado para criar imagens de várias posições no prato, com vários eventos de intercalação esferoide, em um único experimento. Os esferóides das células cancerígenas do ovário se depositam no fundo do prato e se ligam à monocamada das células mesoteliais. Colete GFP, RFP e imagens de fase de mais de 20 interações esferoides/monocamadas a cada dez minutos durante oito horas.

14:25

Avaliação do cancro do ovário esferóide Apego e invasão de células mesoteliais em Tempo real

Vídeos relacionados

0 Visualizações

13:04

In Vivo e Ex Vivo Abordagens para o Estudo do cancro do ovário metastático Colonização de Estruturas Láctea natural em Peritoneal adiposo

Vídeos relacionados

0 Visualizações

11:34

Modelagem do comportamento do cancro do ovário multicelular Spheroid em um microdispositivos 3D Peritoneal Dinâmico

Vídeos relacionados

0 Visualizações

09:18

Ensaio esferóide para TGF-β Medida induzida Invasion

Vídeos relacionados

0 Visualizações

08:54

Ensaio in vitro de Apuramento mesotelial que os modelos dos primeiros passos da metástase do câncer de ovário

Vídeos relacionados

0 Visualizações

03:34

Modelagem de metástase de câncer de ovário no revestimento da cavidade peritoneal: um método para estabelecer um modelo 3D in vitro do revestimento peritoneal

Vídeos relacionados

0 Visualizações

04:36

Isolamento de células mesoteliais: uma técnica para isolar células mesoteliais primárias de espécimes de tecido de omento humano

Vídeos relacionados

0 Visualizações

12:19

Tridimensional (3D) Tumor Esferóide Invasion Assay

Vídeos relacionados

0 Visualizações

05:34

A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

Vídeos relacionados

0 Visualizações

09:00

Modelando os passos iniciais do cancro do ovário Divulgação em uma cultura organotípicas do Peritoneal Cavity Humano

Vídeos relacionados

0 Visualizações

Última atualização: 29 agosto 2026