Ensaio de transplante de gordura ovariana: uma técnica in vivo para introduzir células na almofada de gordura ovariana em modelos de camundongos

O transplante permite a implantação de células ou fragmentos de tecido em locais específicos do corpo em um animal receptor. Isso nos ajuda a estudar o papel do microambiente na tumorigênese e metástase.

Para começar, prepare um camundongo fêmea imunocomprometido anestesiado na posição prona. Faça uma incisão cirúrgica na posição dorsomedial para expor seu trato reprodutivo. Localize as bolsas de gordura ovariana situadas perto do ovário e do oviduto. Usando uma agulha de ponta afiada, faça uma incisão perfurando a metade da almofada de gordura sem comprometer o ovário.

Em seguida, injete uma suspensão gelada de células experimentais misturadas com uma matriz de membrana basal adequada na incisão da almofada de gordura. Permita que a matriz solidifique e proteja as células internas. Coloque a almofada de gordura ovariana de volta no peritônio e suture a incisão. Permita que o mouse se recupere.

No transplante bem-sucedido, o coxim gorduroso fornece um microambiente adequado, facilitando a expansão das células injetadas. Verifique o camundongo semanalmente para observar o crescimento de células transplantadas na almofada de gordura ovariana.

Depois de anestesiar um camundongo singênico de acordo com o protocolo de texto, use a tesoura número 40 para raspar uma área com o dobro do tamanho da área cirúrgica. Use iodopovidona seguido de etanol a 70% para realizar três esfregações cirúrgicas. Em seguida, mova o animal sob um microscópio de dissecação.

Em seguida, usando um bisturi, faça uma incisão na posição dorsomedial diretamente acima da gordura ovariana e exponha o trato reprodutivo. Depois, cubra a área com uma cortina estéril. Em seguida, com uma pinça fina e romba, puxe a almofada de gordura ovariana cuidadosamente através da incisão em direção à linha média, minimizando os danos aos nervos e aos principais vasos sanguíneos.

Para evitar o retardo de crescimento dos transplantes, a incisão da almofada de gordura deve ser feita o mais precisa possível, pois rasgar ou perfurar a almofada de gordura até o fim causa sangramento. Coagulantes devem ser usados para parar o sangramento conforme necessário.

Use uma agulha chanfrada de calibre 28 para fazer uma incisão profunda de 2 a 4 milímetros na almofada de gordura ovariana, 3 a 4 milímetros acima do ovário, garantindo que a agulha passe apenas aproximadamente na metade da almofada de gordura. Para transplantes de células, encha uma seringa com uma agulha de calibre 30 com 10 a 20 microlitros da mistura da matriz da membrana basal celular e injete-a na incisão da almofada de gordura.

Para transplante de tuba uterina, use uma pinça fina para pegar a tuba uterina e coloque-a em 10 a 20 microlitros de matriz de membrana basal mantida em gelo. Em seguida, com uma ponta de filtro graduada XL de 0,1 a 10 a 20 microlitros, pegue a suspensão da matriz de tecido e membrana basal e solte-a na incisão da almofada de gordura. Aguarde cinco minutos para que a matriz da membrana basal se solidifique e coloque o trato reprodutivo de volta no peritônio.

Com dois pontos de sutura cirúrgica, feche os músculos e use pequenos clipes de ferida ou suturas cirúrgicas para fechar a pele. Após o transplante, permita que o animal se recupere de acordo com o protocolo de texto.

• Syngeneic Mouse - A mouse that is genetically identical or of the same genotype.
• Anesthetization - The process of causing anesthesia, typically through drugs.
• Ovarian Fat Pad - Fatty tissue surrounding the ovaries in female mammals.
• Surgical Drape - Sterile fabric used during surgery to isolate the surgical site.
• Coagulant - A substance that encourages blood to clot, halting bleeding.

• Anesthetizing a syngeneic mouse occurs prior to surgery (e.g., dorsal fat pad).
• Shaving and surgical scrub is used for cleanliness (e.g., a1413202).
• Fine forceps are used to position the ovarian fat pad (e.g., surgical drape).
• Bleeding is stopped with coagulants when necessary (e.g., ovarian fat pad).

• [Question 1] What steps are taken when anesthetizing a syngeneic mouse?
• [Question 2] How is the ovarian fat pad exposed during surgery?
• [Question 3] What is the application of coagulants in the surgical procedure?

• The process has real-world applications in medical surgery (e.g., coagulant).
• It has an important impact within the biomedical research industry (e.g., syngeneic mouse).
• This technique can be used in studies related to female reproductive health (e.g., ovarian fat pad).
• The method is a significant advancement in transplantation surgeries (e.g., a1413202).