Inoculação ortotópica de células de câncer de ovário em ovário murino: um procedimento para estabelecer um modelo de camundongo com câncer de ovário para estudar a disseminação peritoneal de células

A inoculação ortotópica ajuda a entregar células cancerígenas a um animal receptor em um tecido ou local específico que corresponda à localização anatômica natural das células. Para começar, prepare uma rata nua anestesiada, com a barriga para baixo, em um palco cirúrgico. Faça uma incisão vertical perto de sua coluna em uma posição entre a caixa torácica e o fêmur. Abra os músculos abdominais para expor parcialmente a cavidade peritoneal. Localize um dos ovários.

Prepare uma suspensão de células de câncer de ovário com matriz extracelular gelada em uma seringa. A baixa temperatura impede que a suspensão se solidifique. Injete esta suspensão no ovário do camundongo. Segure a agulha no lugar para permitir que a matriz se solidifique e incorpore as células cancerígenas dentro do ovário. Retraia a agulha. Suturar a incisão para fechar a ferida. Permita que o mouse se recupere.

Com o tempo, as células de câncer de ovário injetadas proliferam para formar um tumor primário. Eventualmente, algumas células se desprendem de sua localização primária e se disseminam dentro da cavidade peritoneal. Quando essas células tumorais migratórias se ligam ao revestimento da cavidade peritoneal, elas invadem o tecido peritoneal e proliferam para formar tumores secundários metastizados.

Para realizar a inoculação ortotópica, após anestesiar uma fêmea nua de oito semanas de idade de acordo com o protocolo de texto, faça uma pinça do dedo do pé para verificar a profundidade da anestesia. Coloque o mouse anestesiado em um estágio de operação, com a barriga para baixo. Em seguida, desinfete a área cirúrgica com várias lavagens usando um esfoliante à base de clorexidina e álcool.

Em seguida, faça uma incisão vertical de aproximadamente 2 centímetros perto da coluna, entre o arco costal direito e o fêmur. Coloque um campo cirúrgico estéril ao redor do local da incisão. Em seguida, fixe as superfícies da pele incisada com grampos para manter a abertura.

Agora, faça uma segunda incisão de 1 centímetro no peritônio parietal sob a primeira incisão para abrir a cavidade abdominal. Em seguida, prenda as superfícies abdominais incisas. Com uma pinça, corte o tecido adiposo que envolve o ovário ipsilateral e a trompa de Falópio para remover o ovário da cavidade abdominal.

Em seguida, coloque cuidadosamente o ovário e a trompa de Falópio em gaze antes de colocar o camundongo, com a barriga para baixo, sob o microscópio de dissecação. Transfira a suspensão celular para uma seringa de insulina. Em seguida, injete imediata e cuidadosamente 1 a 2 microlitros da suspensão celular preparada no ovário.

Por alguns segundos, mantenha a agulha no ovário para garantir que o hidrogel endureça. Após a gelificação, as células tumorais injetadas permanecerão no ovário. Com cuidado, devolva o ovário ao corpo. Com seda médica estéril, suture a segunda incisão antes de usar clipes de ferida para selar a pele.

• Orthotopic Inoculation - Process of delivering cancer cells to a specific tissue in a recipient animal.
• Ovarian Cancer - A type of cancer that starts in the ovaries of female mammals.
• Ovarian Cancer Cells - Cancerous cells that originate in the ovaries.
• Murine Model - A lab mouse used for experimental purposes.
• Peritoneal Cancer - Cancer that develops in the lining of the abdomen called the peritoneum.

• Introduce Orthotopic Inoculation - Placement of cells in their natural location (e.g., ovary of mouse).
• Key Concepts - Understand the development of ovarian cancer (e.g., tumor inoculation).
• Underlying Mechanisms - Description of how cancer metastasizes (e.g., peritoneal dissemination).
• Connect to Experiment - Contextualize the murine model's role in studying ovarian cancer.

• What is orthotopic inoculation and how does it relate to ovarian cancer cells?
• Why are murine models crucial for understanding ovarian cancer?
• How does peritoneal dissemination contribute to metastasis?

• Describe Practical Applications - Orthotopic inoculation aids in studying cancer (e.g., ovarian tumor).
• Industry Impact - Research impacts oncology and healthcare (e.g., cancer treatment).
• Societal Importance - Advancements may increase survival rates (e.g., improved therapy).
• Link to Scientific Advancements - Discoveries entail new therapeutic technologies.