Janela de ovo: um método de abertura de casca de ovo de galinha fertilizada para expor a vasculatura da membrana corioalantóide

Em um ovo de galinha fertilizado, a membrana corioalantóide ou CAM é uma camada altamente vascularizada localizada abaixo da membrana interna da casca do ovo. Funciona para apoiar o desenvolvimento embrionário.

Para expor um CAM totalmente desenvolvido, comece colocando um candler de ovo - uma fonte de luz brilhante - contra a casca do ovo para visualizar o interior do ovo. Localize a célula de ar entre as membranas externa e interna da casca do ovo e uma vasculatura ramificada proeminente dentro do ovo. Marque suas posições externamente.

Nesses pontos, faça pequenos orifícios circulares na casca do ovo para expor a membrana branca subjacente. Perfure suavemente a membrana exposta em ambos os locais sem interromper o CAM ou causar albumina ou vazamento de sangue.

Mantendo o ovo longitudinalmente, aplique sucção sobre a abertura natural da câmara de ar para retirar o ar de dentro. A pressão negativa resultante reduz o CAM abaixo da segunda abertura, gerando uma célula de ar artificial sobre a rede vascular.

Descreva a célula de ar realocada. Corte a casca do ovo, alguns centímetros internos ao contorno, sem interromper o limite da célula de ar-CAM. Remova a concha incisa para criar uma janela grande, expondo o CAM e a vasculatura subjacentes. Use um filme transparente para selar a janela em ovos viáveis.

No dia 7 ou 8 de desenvolvimento, quando o CAM estiver totalmente desenvolvido, desligue o rotador de ovos e coloque aproximadamente 1 a 3 ovos na prateleira de ovos no gabinete de biossegurança. Com as luzes apagadas, coloque um candler de ovo contra a casca do ovo para identificar e marcar a localização da câmara de ar de um ovo. Em seguida, mova o candler do ovo sobre a casca para encontrar uma grande rede de vasos sanguíneos, girando o ovo conforme necessário.

Uma vasculatura ideal se ramificará perto do meio do ovo. Use um marcador para traçar a vasculatura a ser usada para implantação. Depois de ligar novamente a luz do capô, use uma ferramenta rotativa sem fio equipada com uma pedra de esmeril de carboneto de silício para fazer um pequeno orifício no invólucro diretamente sobre o centro da célula de ar. Quando a maior parte da casca tiver sido removida, mas com a membrana interna branca intacta, faça outro pequeno orifício onde a janela vascular será aberta como acabamos de demonstrar. Quando o segundo orifício estiver pronto, use uma agulha de calibre 18 para perfurar suavemente a membrana interna branca sobre a célula de ar e a vasculatura, tomando cuidado para que a membrana interna branca, mas não o CAM, seja rompida em toda a área perfurada.

Com a luz do capô apagada novamente, use o candler de ovo para verificar se a célula de ar foi transferida da extremidade do ovo para a área sobre a vasculatura. Se necessário, coloque um tubo de vácuo inserido em um controlador de pipeta ao redor do orifício sobre a câmara de ar original e aplique suavemente a sucção em rajadas curtas para mover a câmara de ar. Marque o contorno da nova localização da célula de ar, aproximadamente 0,5 centímetros dentro do limite ar-CAM, e fixe um pedaço de fita adesiva grande o suficiente para cobrir o orifício sobre a nova célula de ar.

Depois de preparar os outros dois ovos como acabamos de demonstrar, devolva os ovos à incubadora e abra quaisquer ovos adicionais para o experimento em grupos de 1 a 3, conforme demonstrado. Quando todos os ovos tiverem sido abertos, transfira de 1 a 3 ovos com células de ar realocadas para a prateleira de ovos no gabinete de biossegurança e use uma ferramenta rotativa sem fio equipada com uma roda de corte circular para cortar uma pequena linha sobre o limite da célula de ar completamente através da célula sem interromper o CAM ou vasculatura. Usando uma tesoura curva, corte ao redor da célula de ar restante para criar uma janela na casca e verificar a viabilidade do embrião.

Os embriões viáveis exibirão uma vasculatura extensa, albumina clara, movimento do embrião e/ou batimentos cardíacos visíveis. Em embriões não viáveis, o CAM pode parecer opaco com poucos ou nenhum vaso presente e os embriões podem ser pequenos ou ausentes sem movimento ou batimentos cardíacos. Usando uma pinça Semken, puxe pequenos pedaços de algodão de uma bola de algodão estéril e seque suavemente a superfície CAM dos embriões viáveis para remover qualquer poeira e detritos da casca. Em seguida, cubra a abertura da casca com um quarto de um pedaço de curativo de filme transparente de 6 por 7 centímetros sem tocar no CAM e devolva os ovos à incubadora com a janela aberta voltada para cima. Use um pedaço de prateleira de ovos, a borda do rotador de ovos ou outro item adequado para sustentar os ovos que continuam rolando.