Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:26 min. • April 30th, 2023
A membrana corioalantóide de galinha, ou CAM, é uma membrana altamente vascularizada encontrada nos ovos de certos vertebrados, como galinhas. Esta membrana extra-embrionária reveste uma membrana de concha não vascular e funciona como o local de troca de oxigênio gasoso e dióxido de carbono entre o embrião e o meio ambiente.
Para gerar um modelo de câncer CAM, comece com um ovo de galinha fertilizado viável com um CAM totalmente desenvolvido com uma casca parcialmente aberta que expõe sua vasculatura ramificada. Confirme se o CAM está separado da membrana do invólucro.
Coloque um anel antiaderente estéril sobre um ponto de ramificação do vaso sanguíneo. Usando uma haste de vidro, esfregue suavemente a membrana dentro do anel para raspar sua camada epitelial externa e expor a camada mesodérmica subjacente que carrega a vasculatura. Pipet uma suspensão gelada de células cancerígenas misturadas com uma matriz extracelular adequada no anel. O anel restringe a dispersão celular.
Permita que a matriz se solidifique para proteger as células internas. Sele a abertura da casca do ovo e incube o ovo nas condições apropriadas. A vasculatura densa dentro da camada mesodérmica fornece oxigênio e nutrientes essenciais para as células cancerígenas, proporcionando assim um microambiente adequado para seu crescimento e expansão.
Para preparar uma suspensão de células cancerígenas para transplante, colha as células da cultura de células cancerígenas de interesse e sedimente as células por centrifugação. Aspirar o sobrenadante e ressuspender mecanicamente as células no meio residual. Coloque a suspensão celular no gelo e use uma pipeta para medir o volume das células no meio. Em seguida, ressuspenda as células a uma concentração de 1 a 2 milhões de células em 20 a 100 microlitros de meio, suplementado com 2,7 a 4 miligramas por mililitro de matriz extracelular e quaisquer fatores de crescimento ou outros aditivos de interesse.
Para a implantação de células cancerígenas, usando um anel antiaderente, coloque até 6 ovos a serem implantados na prateleira de ovos e role as bordas do curativo de filme transparente em direção à janela aberta para remover o filme das cascas. Verifique se os ovos são viáveis e saudáveis. Os ovos ideais terão um vaso grande com vasos ramificados menores no centro da área aberta.
Usando uma pinça de íris curva, coloque um anel antiaderente estéril no CAM sobre o vaso, de preferência sobre um ponto de ramificação. Use uma haste de agitação de vidro estéril para lixar suavemente o CAM e pipetar a suspensão de células cancerígenas no centro do anel. Quando todas as células tiverem sido entregues, sele a abertura com um quarto de curativo de filme transparente de 6 por 7 centímetros e rotule o ovo com uma designação de implante apropriada. Em seguida, coloque o ovo com segurança na incubadora, com a abertura da casca voltada para cima.