Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:43 min. • April 30th, 2023
A técnica de incorporação de parafina fixada em formalina ou FFPE permite a preservação de amostras de tecido fixas, desidratadas e limpas dentro de blocos de parafina para armazenamento de longo prazo. O FFPE preserva proteínas e outros componentes intracelulares vitais sem comprometer a morfologia do tecido.
A desparafinização, ou a remoção da cera de parafina ao redor do tecido incorporado, é uma etapa crítica antes do processamento de qualquer amostra de tecido FFPE para análise a jusante. Para iniciar a desparafinização, comece com uma lâmina de vidro carregando uma seção de tecido FFPE não corada de interesse com uma espessura apropriada.
Mergulhe a seção de tecido em um banho de xileno e incube pela duração desejada. O xileno, um solvente orgânico, dissolve a cera de parafina que se incorporou e penetrou no tecido. A remoção completa da cera de parafina expõe a amostra de tecido transparente fixa e desidratada.
Após a desparafinização, trate a amostra com etanol absoluto. O etanol desloca e remove quaisquer vestígios de xileno da seção do tecido. Em seguida, mergulhe o tecido em concentrações decrescentes de etanol. O processo reidrata o tecido para análise histológica a jusante.
Por fim, deixe o slide intacto pela duração desejada. Esta etapa permite que o etanol e a água evaporem e obtenham uma seção de tecido seco e reidratado.
Para começar, prepare 10 micrômetros de seções não coradas fixadas em formalina e embebidas em parafina. Coloque as lâminas em um suporte de lâmina de vidro e encha-o com xileno, certificando-se de que todo o tecido da lâmina esteja submerso. Deixe as lâminas em xileno por 15 minutos. Em seguida, despeje o xileno enquanto segura as lâminas com uma ponta de pipeta para que não caiam. Despeje mais xileno no mesmo nível de antes e repita a incubação.
Despeje o xileno e encha o suporte da lâmina com 100% de etanol, certificando-se de que todo o tecido da lâmina esteja totalmente submerso. Deixe as lâminas no etanol por 3 minutos. Em seguida, substitua o etanol por etanol fresco e deixe-os incubar por mais dois minutos. Despeje o etanol e remova as lâminas. Coloque-os cuidadosamente virados para cima sobre uma toalha de papel limpa e deixe-os secar por 10 minutos.