Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:31 min. • April 30th, 2023
Para iniciar a macrodissecção, pegue uma lâmina de vidro carregando uma amostra de tecido. Além disso, pegue uma lâmina de referência com a mesma amostra de tecido e comode-a usando hematoxilina e eosina para coloração de H & E.
Em células normais, a hematoxilina confere uma coloração azul aos ácidos nucléicos, enquanto a contracoloração de eosina mostra as proteínas celulares rosa. A coloração azul profunda do núcleo ajuda a diferenciar as células cancerígenas das células normais.
Sobreponha a lâmina corada com H&E com a lâmina não corada para alinhar as amostras de tecido. Localize a porção que contém células tumorais na lâmina corada com H&E. Marque a área correspondente no slide não manchado.
Raspe o tecido desejado da lâmina não corada. Usando uma ponta de pipeta úmida, colete o tecido raspado para garantir uma fácil transferência da amostra de tecido. Transfira o tecido para um tubo contendo um tampão de lise. Os componentes do tampão de lise digerem o tecido, liberando os constituintes da célula.
Tratar o lisado com uma protease adequada e incubar a uma temperatura elevada. A protease cliva as DNases contaminantes, protegendo assim o DNA da degradação. Armazene o DNA contendo lisado de tecido para análise a jusante.
Identifique os tecidos cancerígenos da área tumoral mais adequada para macrodissecção de acordo com a seção corada de H & E apropriada. Em seguida, macrodisseque o tecido canceroso com base na seção marcada. Pegue uma lâmina de barbear limpa e raspe suavemente o tecido cancerígeno da lâmina, tentando mantê-lo inteiro. Use a ponta da pipeta para transferir o tecido raspado para o frasco tampão de lise.
Repita esse processo com o restante dos slides. Depois que todo o tecido estiver no tubo, use a ponta para garantir que o tecido esteja totalmente submerso e não grudado na parede. Adicione 20 microlitros de uma serina protease relacionada à subtilisina ao frasco e agite suavemente para misturar. Coloque o frasco em um bloco de calor a 55 graus Celsius por pelo menos 4 horas ou durante a noite, certificando-se de um ligeiro vórtice após 2 horas.