Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:36 min. • April 30th, 2023
A metilação do DNA envolve a adição de grupo metil aos resíduos de citosina do DNA para formar metilcitosina, causando alteração do DNA e regulação da expressão gênica.
Para estudar a metilação do DNA, comece tomando extrato bruto de DNA de células cancerígenas. Adicionar um tampão de diluição e incubar à temperatura ambiente. O tampão dilui a mistura e desnatura o DNA de fita dupla em DNA de fita simples, favorecendo a acessibilidade das bases para reações subsequentes.
Adicione um reagente de conversão e incube no escuro. O bissulfito de sódio no reagente desencadeia a sulfonação e subsequente desaminação de resíduos de citosina não metilada, resultando na formação de uracila-sulfonato. No entanto, os resíduos de citosina metilada permanecem inalterados.
Em seguida, complemente o DNA com um tampão de ligação e transfira-o para uma coluna de filtro de rotação pré-montada. O tampão ajuda o DNA a se ligar ao filtro.
Centrifugue para remover o tampão e a mistura de reagentes de bissulfito do DNA preso na coluna. Descarte o fluxo. Adicione um tampão de dessulfonação alcalina ao DNA. O tampão auxilia na remoção do grupo sulfito do uracil-sulfonato para formar uracila.
Centrifugue para
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