Coloração de fibras elásticas de cortes de lâminas: uma técnica para observar metástases de câncer gástrico

A coloração de fibras elásticas ajuda a examinar a invasão de células cancerígenas além da lâmina elástica peritoneal ou do tecido elástico submesotelial.

Para começar, adicione solução de permanganato de potássio a uma seção de tecido processada, seguida de imersão em ácido oxálico. A forte propriedade oxidante da combinação de permanganato de potássio e ácido oxálico branqueia o pigmento natural da seção do tecido para evitar interferência no processo de coloração, obscurecendo a morfologia da fibra elástica.

Enxágue a lâmina com água e etanol para remover qualquer agente de branqueamento residual. Em seguida, incube a amostra em uma coloração de elastina que compreende um complexo ferro-hematoxilina. A elastina, principal componente da fibra elástica, tem forte afinidade pelos complexos ferro-hematoxilina.

Lave a lâmina com etanol e água para remover qualquer mancha residual. Finalmente, trate a amostra com uma contracoloração contendo ácido pícrico e Ponceau S. As moléculas menores de ácido pícrico penetram em todos os tipos de tecido, mas são firmemente retidas pelo músculo de textura próxima e pelas células cancerígenas. Em contraste, as moléculas maiores de Ponceau S deslocam o ácido pícrico no colágeno de textura porosa, fazendo com que o colágeno seja corado de maneira diferente das células musculares e cancerígenas.

Quando observadas ao microscópio, as fibras elásticas aparecem como filamentos preto-azulados. O colágeno fica vermelho, enquanto as células musculares e cancerígenas aparecem amarelas. As células cancerígenas amarelas que penetram na lâmina elástica azul-preta confirmam a invasão metastática.

Primeiro, use papel de seda para limpar qualquer excesso de solução na lâmina ou ao redor do lenço. Coloque as lâminas em condições que correspondam à temperatura e umidade do ambiente. Adicione algumas gotas de permanganato de potássio a cada lâmina para oxidá-las, certificando-se de que o volume adicionado seja suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após 5 minutos, enxágue as lâminas oxidadas com água destilada em potes Coplin, repetindo o enxágue duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue. O tecido deve ter uma cor marrom observável.

Agora, adicione algumas gotas de ácido oxálico a cada lâmina para branqueá-las, certificando-se de que o volume adicionado seja suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após 5 minutos, enxágue as lâminas de alvejante com água destilada, repetindo o enxágue duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue. Lave as lâminas brevemente em álcool 95%.

Mergulhe as lâminas lavadas em solução de elastina por 8 a 24 horas. Em seguida, mergulhe as lâminas diretamente em etanol a 95% por 1 a 2 minutos para diferenciar bem cada seção de tecido. Enxágue as lâminas completamente com água destilada.

Verifique microscopicamente a coloração das fibras elásticas azul-pretas e o fundo cinza. É melhor diferenciar um pouco o tecido, pois a contracoloração de Van Gieson subsequente também pode extrair um pouco a mancha elástica.

Contra-corar as lâminas em uma solução de Van Gieson por 1 minuto, certificando-se de que o volume usado seja suficiente para cobrir completamente a seção de tecido em cada lâmina. Em seguida, coloque rapidamente etanol a 95% nas fatias de tecido por alguns segundos para diferenciar bem cada seção de tecido.