Microscopia de fluorescência de armadilhas extracelulares de neutrófilos ou NETs: uma técnica para observar a interação adesiva entre células cancerígenas e NETs

Sob condições patológicas como câncer, os neutrófilos ativados liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos ou NETs - uma malha de DNA extracelular com enzimas associadas e proteínas antimicrobianas - que aprisionam as células cancerígenas circulantes.

Para visualizar a interação adesiva entre NETs e células tumorais in vitro, comece cultivando neutrófilos de baixa densidade, um subtipo de neutrófilos, em uma placa de cultura revestida com polímero que promove a fixação celular. Incube por algumas horas para estimular os neutrófilos a formar NETs semelhantes a teias.

Adicione uma suspensão de células cancerígenas marcadas com fluoresceína vermelha à cultura de neutrófilos. Incube as células cancerígenas com TNEs por um breve período para facilitar a interação célula cancerígena-NET. O NET-DNA atua como um fator quimiotático que atrai células cancerígenas e promove sua adesão aos TNEs.

Remova o meio gasto. Lave suavemente a cultura com um meio fresco adequado para remover bem quaisquer células tumorais soltas da cultura.

Agora, adicione uma mancha nuclear fluorescente verde impermeável à membrana para colorir os TNEs extracelulares seletivamente. Observar a cultura ao microscópi