Seccionamento, coloração e imagem TEM de exossomos incorporados: um protocolo para visualizar as características estruturais de exossomos usando TEM

0 views • 2:32 min • April 30th, 2023

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Os exossomos são vesículas esféricas nanosdimensionadas envolvidas por uma bicamada lipídica contendo moléculas de DNA, RNA e proteínas presentes dentro do lúmen.

Para visualizar a estrutura do exossomo usando microscopia eletrônica de transmissão, ou TEM, comece pegando um bloco de exossomos - um bloco de matriz sólida contendo os exossomos incorporados. Usando um ultramicrótomo, obtenha seções ultrafinas do bloco de exossomos.

Recolha a secção do exossoma numa grelha adequada e deixe-a aderir à superfície. A grade fornece suporte estável para a amostra do exossomo para as etapas de coloração subsequentes.

Em seguida, posicione a grade sobre uma gota de acetato de uranila - uma mancha de metal pesado - e incube pela duração desejada. Os íons uranilo interagem com lipídios, proteínas, DNAs e RNAs presentes nos exossomos.

Posteriormente, core a seção do exossomo com citrato de chumbo, que também se liga às biomoléculas exossômicas. O citrato de chumbo liga-se fracamente aos íons de uranilo pré-ligados e aumenta o contraste contra o fundo durante a imagem.

Observe os exossomos duplamente corados usando TEM. O MET focaliza o feixe de elétrons na amostra do exossomo. As regiões coradas no exossomo espalham elétrons mais fortemente em comparação com as regiões não coradas.

A abertura objetiva filtra esses elétrons altamente espalhados. Assim, os exossomos contendo biomoléculas coradas parecem mais escuros que o fundo.

Usando um ultramicrótomo, prepare seções com espessura de 60 nanômetros. Coloque as seções em uma grade de níquel e core duas vezes algumas delas com acetato de uranila a 2% por 20 minutos, seguido de citrato de chumbo por 10 minutos. Em seguida, coloque a seção corada em um microscópio eletrônico de transmissão e view a amostra usando 80 kV e siga as configurações automáticas para o tempo de exposição. Com uma imagem de exossomo à vista, adquira e salve a imagem usando o software do microscópio.

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Um método para a obtenção de seções ultra-finas Serial de microorganismos em microscopia eletrônica de transmissão

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Last updated: 4 July 2026