Seccionamento, coloração e imagem TEM de exossomos incorporados: um protocolo para visualizar as características estruturais de exossomos usando TEM

Os exossomos são vesículas esféricas nanosdimensionadas envolvidas por uma bicamada lipídica contendo moléculas de DNA, RNA e proteínas presentes dentro do lúmen.

Para visualizar a estrutura do exossomo usando microscopia eletrônica de transmissão, ou TEM, comece pegando um bloco de exossomos - um bloco de matriz sólida contendo os exossomos incorporados. Usando um ultramicrótomo, obtenha seções ultrafinas do bloco de exossomos.

Recolha a secção do exossoma numa grelha adequada e deixe-a aderir à superfície. A grade fornece suporte estável para a amostra do exossomo para as etapas de coloração subsequentes.

Em seguida, posicione a grade sobre uma gota de acetato de uranila - uma mancha de metal pesado - e incube pela duração desejada. Os íons uranilo interagem com lipídios, proteínas, DNAs e RNAs presentes nos exossomos.

Posteriormente, core a seção do exossomo com citrato de chumbo, que também se liga às biomoléculas exossômicas. O citrato de chumbo liga-se fracamente aos íons de uranilo pré-ligados e aumenta o contraste contra o fundo durante a imagem.

Observe os exossomos duplamente corados usando TEM. O MET focaliza o feixe de elétrons na amostra do exossomo. As regiões coradas