Congelamento instantâneo de tecido muscular para seccionamento: um protocolo para obter cortes ultrafinos de tecido muscular murino rapidamente congelado

O congelamento instantâneo é uma técnica pela qual as amostras de tecido são rapidamente congeladas a temperaturas ultrafrias. Ajuda a reter a estrutura nativa do DNA, RNA e proteínas dentro do tecido.

Para congelar o músculo do membro, comece retirando o tecido muscular recém-extraído do membro posterior de um camundongo.

Em seguida, pegue nitrogênio líquido em uma caixa de isopor e mergulhe um béquer contendo isopentano - um líquido altamente condutor - em nitrogênio líquido.

Congele o isopentano até que a solução fique viscosa. Simultaneamente, aplique uma gota de meio de congelamento líquido em cima de um pedaço de cortiça.

Posicione o tecido muscular dos membros posteriores segurando seu tendão e incorpore o pedaço de tecido verticalmente no meio de congelamento líquido. Essa orientação ajuda na determinação subsequente da área da seção transversal do músculo.

Mergulhe brevemente a peça de cortiça com o tecido muscular anexado no banho de isopentano pré-resfriado. Isso ajuda no congelamento rápido e uniforme do tecido muscular.

O meio de congelamento solidifica a baixa temperatura e forma uma camada gelatinosa ao redor do tecido muscular, mantendo-o no lugar. Coloque o bloco m