Isolamento de células mononucleares da lâmina própria: uma técnica de centrifugação por gradiente de densidade à base de sílica para obter células mononucleares do cólon murino

A lâmina própria intestinal, localizada abaixo do epitélio intestinal, consiste em tecido conjuntivo frouxo junto com uma densa rede de fibras colágenas contendo uma gama diversificada de células, como fibroblastos, células mononucleares, incluindo linfócitos e monócitos. Essas células desempenham um papel crucial na manutenção da homeostase.

Para isolar células mononucleares, comece pegando fragmentos de cólon de camundongos. Trate os fragmentos com um tampão de digestão contendo enzimas colagenase. As enzimas colagenase digerem as fibras de colágeno dentro do tecido, liberando as células em suspensão.

Colete o sobrenadante e filtre-o através de filtros de células para remover tecido não digerido e detritos e obter uma suspensão de célula única. Adicione um tampão resfriado ao filtrado para inativar as enzimas colagenase.

Centrifugue para separar as células. Rejeitar o sobrenadante que contém as enzimas e ressuspender o sedimento celular num meio de separação à base de sílica de baixa densidade. Em seguida, coloque a suspensão sobre um meio de separação à base de sílica de alta densidade para criar um gradiente de separação.

Centrifugue a mistura. As células mononucleares sediment