Isolamento de criptas intestinais: um método para isolar criptas inteiras do intestino delgado do modelo murino

O revestimento intestinal é coberto por projeções ou vilosidades e invaginações ou criptas. As criptas são as glândulas intestinais que secretam principalmente enzimas digestivas.

Para isolar criptas do intestino delgado, comece posicionando um camundongo anestesiado em decúbito dorsal em uma placa de dissecação. Usando uma tesoura, disseque o peritônio longitudinalmente para expor o sistema digestivo.

Localize o intestino delgado e puxe-o suavemente para fora do corpo do camundongo. Corte o intestino em sua base. Transfira o intestino colhido para um prato contendo um tampão adequado. Corte o intestino longitudinalmente, expondo o lúmen.

Coloque o intestino, com o lado luminal para cima, em uma tábua de corte para expor as vilosidades. Mova uma lâmina de vidro angular sobre a superfície intestinal para raspar as vilosidades, expondo todas as criptas.

Corte o intestino em pedaços minúsculos e transfira os pedaços para um tubo contendo um tampão gelado para garantir o mínimo de danos às criptas.

Em seguida, trate com EDTA e incuba. O EDTA faz com que todas as criptas se soltem do revestimento intestinal. Remova a solução contendo EDTA gasta. Adicione tampão fresco e triture usando u