Isolamento de colônia de células cancerígenas metastáticas de CAM de galinha: um procedimento para isolar células cancerígenas de culturas de ovos sem casca

A membrana corioalantóide de galinha ou CAM é uma membrana de três camadas localizada logo abaixo da casca do ovo. Consiste em um ectoderma externo, um mesoderma altamente vascular e o endoderma mais interno.

O mesoderma CAM é composto por vasos sanguíneos, fibroblastos e componentes estromais e, portanto, fornece um ambiente favorável para a colonização de células tumorais.

Para isolar células cancerígenas colonizadas do CAM, comece tomando uma cultura de ovos sem casca pré-injetada com células cancerígenas marcadas com fluorescência em um prato. Visualize a cultura de ovos sob um microscópio de fluorescência. Localize as colônias de câncer metastático fluorescentes e compactas.

Extirpar suavemente o tecido CAM contendo colônias metastáticas de interesse. Transferir o tecido CAM excisado para um tubo de microcentrífuga. Pique o tecido em pequenos pedaços para tornar o CAM acessível ao tratamento enzimático nas etapas subsequentes.

Suplementar o tubo com enzima colagenase e incubar. A colagenase degrada a proteína de colágeno no mesoderma CAM e inicia a dissociação da colônia de câncer. Centrifugue a suspensão para peletizar as células cancerígenas, restos de tecido CAM e fibroblas