Isolamento e cultura de células epiteliais da língua murina: um procedimento para isolar e cultivar células epiteliais da língua a partir de modelo de camundongo

A língua constitui epitélio escamoso estratificado e uma camada subjacente de tecido conjuntivo denso denominada lâmina própria. O epitélio consiste em células epiteliais escamosas de várias camadas que fornecem proteção contra o estresse mecânico.

Para isolar as células epiteliais, comece com uma língua de rato recém-colhida. Pique a língua para obter fragmentos de tecido menores. Em seguida, trate os fragmentos com um coquetel de digestão personalizado contendo enzimas colagenase, hialuronidase e desoxirribonuclease.

As enzimas colagenase e hialuronidase digerem a matriz extracelular que mantém o tecido unido, promovendo a liberação de células individuais na suspensão. A desoxirribonuclease degrada qualquer DNA livre liberado das células lisadas.

Adicione tampão contendo soro à amostra digerida para inativar as enzimas hidrolisadoras de proteínas. Agora, filtre a amostra através de filtros de células para remover quaisquer fragmentos de tecido e detritos não digeridos e obter uma suspensão unicelular de células epiteliais.

Centrifugue para separar as células. Rejeitar o sobrenadante que contém a mistura de digestão. Ressuspenda o pellet celular em meio fresco. Por fim, transfira o volume desejado desta suspensão celular para uma placa de cultura estéril. Incube a cultura.

As células epiteliais se ligam à superfície inferior da placa de cultura. Dependendo da capacidade proliferativa das células epiteliais individuais, elas começam a formar colônias.

Comece usando uma tesoura cirúrgica para colher a língua de um camundongo transgênico B6 macho ou fêmea de 6 semanas de idade. Use um bisturi para picar o tecido em fragmentos muito pequenos e colete os pedaços em um tubo de 15 mililitros contendo 4,5 mililitros de meio simples RPMI sem soro. Adicione 200 microlitros de mistura tripla de enzimas ao tubo e incube a amostra a 37 graus Celsius por 30 minutos, batendo no tubo a cada 10 minutos para aumentar a dissociação enzimática do tecido. No final da incubação, interrompa a reação com 5% de FBS em PBS e filtre a suspensão celular através de um filtro de malha de 70 micrômetros para separar as células dos fragmentos de tecido maiores.

Colete as células por centrifugação e ressuspenda o pellet em 3 mililitros de meio completo. Em seguida, coloque as células em 3 mililitros de meio completo por prato de 60 milímetros. Transfira os agregados celulares retidos na parte superior do filtro para uma placa de cultura separada de 60 milímetros e adicione 3 mililitros de meio completo. Mantenha os dois pratos na incubadora até que colônias de células distintas sejam formadas.

• Tongue Culture - The procedure of growing and maintaining tongue cells in a controlled environment.
• Epithelial Tongue - The outer layer or surface of the tongue, composed of epithelial cells.
• Culture Dish - A lab container used for growing cells or tissues under controlled conditions.
• Tongue Cells - The cells forming the different tissue types in the tongue.
• Cell Culture Dish - Another name for culture dish used for cellular experiments and cultures.

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