Isolamento e cultura de células epiteliais da língua murina: um procedimento para isolar e cultivar células epiteliais da língua a partir de modelo de camundongo

A língua constitui epitélio escamoso estratificado e uma camada subjacente de tecido conjuntivo denso denominada lâmina própria. O epitélio consiste em células epiteliais escamosas de várias camadas que fornecem proteção contra o estresse mecânico.

Para isolar as células epiteliais, comece com uma língua de rato recém-colhida. Pique a língua para obter fragmentos de tecido menores. Em seguida, trate os fragmentos com um coquetel de digestão personalizado contendo enzimas colagenase, hialuronidase e desoxirribonuclease.

As enzimas colagenase e hialuronidase digerem a matriz extracelular que mantém o tecido unido, promovendo a liberação de células individuais na suspensão. A desoxirribonuclease degrada qualquer DNA livre liberado das células lisadas.

Adicione tampão contendo soro à amostra digerida para inativar as enzimas hidrolisadoras de proteínas. Agora, filtre a amostra através de filtros de células para remover quaisquer fragmentos de tecido e detritos não digeridos e obter uma suspensão unicelular de células epiteliais.

Centrifugue para separar as células. Rejeitar o sobrenadante que contém a mistura de digestão. Ressuspenda o pellet celular em meio fresco. Por fim, transfira