Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:36 min. • April 30th, 2023
Durante a inoculação intramucosa ortotópica, as células tumorais que correspondem ao histotipo do tecido mucoso são entregues ao tecido mucoso de um animal receptor.
Para começar, prenda um camundongo anestesiado pelo pescoço em uma plataforma cirúrgica para facilitar o acesso à boca.
Prepare uma suspensão de células cancerígenas altamente metastizantes em uma matriz de membrana basal resfriada em uma seringa. A baixa temperatura impede que a suspensão se solidifique.
Injete cuidadosamente esta suspensão na parte interna da bochecha ou na região bucal do mouse. A região bucal é revestida pela mucosa bucal, que é circundada por uma rede de vasos sanguíneos e linfáticos.
Garanta a entrega completa da suspensão de células cancerígenas e retraia suavemente a agulha. Permita que a matriz solidifique e incorpore as células dentro.
Permita que o mouse se recupere. Poucos dias após a injeção, um tumor primário se desenvolve no local da injeção. Eventualmente, as células desse tumor com alto potencial metastático podem viajar pelo sistema linfático e extravasar para os linfonodos.
Essas células cancerígenas se adaptam ao seu novo microambiente e proliferam e estabelecem colônias metastáticas nos gânglios linfáticos.
Imediatamente antes da injeção, misture as células em uma proporção de suspensão de células tumorais de 1 para 1 para matriz da membrana basal no gelo. Carregue uma seringa de 0,5 mililitro equipada com uma agulha 23G com 100 microlitros de células por animal receptor. Coloque as seringas no gelo e confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um camundongo anestesiado.
Em seguida, insira a agulha na região vestibular direita ou esquerda através do espaço aberto disponível em ambos os lados da boca, mantendo a seringa paralela à região bucal enquanto estiver dentro da cavidade oral, para facilitar a injeção do volume total de 100 microlitros da suspensão da matriz da membrana basal celular por um período de 5 segundos. Mantenha a seringa no lugar por mais 5 segundos para garantir que todo o material foi injetado antes de retirar a seringa suavemente. Os tumores se tornarão grosseiramente visíveis em cerca de uma semana.