Pré-tratamento de tecido FFPE para RNA CISH: um procedimento para processar seções de tecido embebidas em parafina fixadas em formalina para hibridização in situ cromogênica de RNA

O pré-tratamento de seções de tecido fixadas em formalina, embebidas em parafina ou FFPE facilita a exposição de ácidos nucléicos e permite a ligação de sondas marcadas à sequência alvo durante a hibridização in situ subsequente. Além disso, o pré-tratamento ajuda a manter a integridade dos ácidos nucléicos dentro das células e a morfologia geral do tecido.

Para começar, pegue uma lâmina de vidro com uma seção de tecido FFPE desparafinizado e reidratado de interesse. Trate o tecido com uma concentração adequada de peróxido de hidrogênio e incuba.

O peróxido de hidrogênio inativa irreversivelmente a peroxidase endógena, que está fisiologicamente presente nas células. Esse processo de bloqueio elimina a possibilidade de sinais de fundo não específicos durante as etapas subsequentes de hibridização.

Em seguida, mergulhe a seção de tecido em um banho aquecido contendo um tampão de recuperação de antígeno apropriado. Incube pela duração desejada. A alta temperatura cliva reticulações químicas induzidas por fixadores em proteínas e ácidos nucléicos, expondo os epítopos desmascarados a sondas durante a marcação subsequente.

Finalmente, trate a amostra com uma solução de protease adequada.