Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:42 min. • April 30th, 2023
Para detectar sinais cromogênicos durante a hibridização de RNA, comece fazendo uma seção de tecido em uma lâmina de vidro. Esta seção contém RNA alvo, pré-hibridizado com sonda de RNA marcada com peroxidase de rábano.
Dispense algumas gotas de diaminobenzidina ou DAB, um substrato de detecção, sobre a seção do tecido e incuba.
O DAB entra na célula e a enzima peroxidase de rábano a oxida para formar um precipitado marrom. Essa reação confere uma cor marrom a sequências específicas de RNA na célula. As células que não contêm RNA alvo não terão atividade de peroxidase e permanecerão sem coloração.
Em seguida, contra-core a seção de tecido com hematoxilina. A hematoxilina se liga ao DNA e confere uma coloração roxa à seção do tecido.
Trate a seção do tecido com água de amônia - uma solução azulada. Reduz a intensidade da mancha roxa, fazendo com que as células pareçam azuis. Esta etapa é essencial para uma visualização clara das manchas marrons dentro das células.
Agora, mergulhe a seção de tecido em concentrações crescentes de etanol e, posteriormente, trate-a com xileno - um solvente orgânico. Essas etapas desidratam a seção de tecido para obter melhores imagens.
Por fim, sele a lâ
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