JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 2:24 min • April 30th, 2023
A membrana corioalantóide ou CAM é uma membrana extraembrionária, aderindo estreitamente à membrana interna da casca de um ovo intacto. O CAM é um sistema ideal para implantação e modelagem de tumores, pois é uma membrana naturalmente imunodeficiente e altamente vascularizada.
Para colher um CAM portador de tumor, primeiro pegue um ovo de galinha fertilizado viável com um CAM totalmente desenvolvido previamente transplantado com um tumor. Adicione paraformaldeído ao CAM. O paraformaldeído reticula as proteínas da membrana, tornando a membrana mais rígida para facilitar sua colheita.
Em seguida, corte ao redor do ovo para separar a parte superior da casca do ovo do restante do ovo, com o CAM portador do tumor ainda preso à casca removida. Segure e levante o CAM em uma das bordas para separá-lo suavemente da casca do ovo.
Em seguida, coloque o CAM colhido em paraformaldeído com o enxerto tumoral voltado para cima. O paraformaldeído preserva a morfologia do CAM e do enxerto tumoral, preparando assim a membrana colhida para várias análises a jusante.
No final da incubação, coloque os ovos na bancada do laboratório. Use uma seringa para perfurar o curativo de filme de cada ovo e aplique cerca de 300 microlitros de paraformaldeído a 4% sobre cada membrana corioalantóide para endurecer levemente o tecido e facilitar o processo de colheita.
Usando uma tesoura, remova a metade superior da casca do ovo com a membrana corioalantóide presa. Reduza o tamanho da concha para aproximadamente 3 centímetros de diâmetro, mantendo a porção da membrana corioalantóide onde o gânglio da raiz dorsal e as células tumorais foram enxertadas no centro do fragmento da concha. Em seguida, segure a membrana corioalantóide com uma pinça fina e separe o tecido da casca do ovo para transferência para um poço de uma placa de 6 poços contendo 2 mililitros de paraformaldeído a 4% por poço.