Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:22 min. • April 30th, 2023
A moagem criogênica ou criomoagem é uma técnica que permite que amostras de tecido descelularizado sejam resfriadas a temperaturas extremamente baixas e moídas em um pó fino, mantendo sua composição bioquímica.
Para começar, obtenha uma matriz extracelular descelularizada derivada de tecido liofilizado ou ECM de interesse. Pique para obter pequenos fragmentos.
Em seguida, transfira os fragmentos de ECM picados para um frasco de moagem. Introduza as esferas de moagem no jarro de moagem. Mergulhe o frasco de moagem carregado em nitrogênio líquido para congelar a amostra a -196 °C.
Carregue o frasco resfriado em um sistema de criomoagem. Submeter a amostra congelada a criomoagem com uma frequência adequada durante a duração desejada.
Durante a criomoagem, o jarro de moagem oscila radialmente na posição horizontal. Em consequência, a inércia das esferas de moagem facilita o impacto da amostra congelada com alta energia nas extremidades arredondadas do frasco e a pulverização.
Além disso, o movimento do jarro de moagem juntamente com o movimento das esferas de moagem promove uma mistura intensiva da amostra para obter um pó fino com distribuição uniforme do tamanho das partículas.
Agora, transfira o pó de ECM criomoizado para um frasco de vidro. Feche bem o frasco para evitar a exposição à umidade. Dessecar a amostra até nova utilização.
Use uma tesoura cirúrgica afiada para picar finamente o tecido descelularizado. Para criomill o tecido processado, encha uma câmara de moagem de aço inoxidável de 25 mililitros para um sistema de moinho de bolas de laboratório com ECM liofilizado picado e adicione duas esferas de fresagem de aço inoxidável de 10 milímetros.
Feche e mergulhe completamente a câmara de moagem carregada em nitrogênio líquido por 3 minutos. Em seguida, moa a amostra congelada a 30 hertz por 3 minutos. Repetir a submersão em azoto líquido e a moagem até que a ECM seja moída até formar um pó fino.