Fabricação de Bioscaffold por Eletropulverização: Uma Técnica para Gerar Scaffolds Microcarreadores Derivados de Matriz Extracelular de Tecido Descelularizado

Os microtransportadores são matrizes de suporte esféricas de tamanho mícron com poros interconectados que fornecem uma superfície expansiva para fixação e crescimento celular.

Para fabricar matriz extracelular ou microtransportadores derivados de ECM, comece com uma suspensão uniforme de ECM finamente pulverizada. Coloque a suspensão numa seringa ligada a um conjunto de perfusão. Prenda a seringa em uma bomba de seringa. Posicionar a agulha verticalmente sobre um balão criogénico a uma distância adequada.

Agora, conecte a agulha ao terminal positivo de um alto voltage fonte de alimentação. Prenda uma tira de papel alumínio dobrada sobre a borda do frasco e conecte-a ao terminal de aterramento para completar o circuito.

Em seguida, encha o nitrogênio líquido no frasco com a extremidade interna da tira de alumínio submersa. Aplique o volume desejadotage e ajuste a bomba de seringa para uma taxa de fluxo adequada para iniciar a eletropulverização. À medida que a suspensão condutora ECM emerge da ponta da agulha, sua forma se deforma sob a influência do campo elétrico e da tensão superficial, formando um cone líquido pontiagudo.

Com incrementos de tensão, a suspensão é lançada. Isso eventualmente se quebra em gotículas menores carregadas e cai no banho de nitrogênio líquido. O nitrogênio líquido congela instantaneamente as microgotículas, cristalizando as partículas de solvente dentro delas.

Transfira as microgotículas congeladas para um tubo novo. Liofilizar a amostra. Esta etapa ajuda a remover partículas de solvente congeladas da amostra, gerando poros em seu lugar. Armazene o pó seco de microtransportadores porosos para outras aplicações.

Incubar a suspensão ECM criomonada com agitação contínua a 100 rpm durante a noite. Carregue 3 mililitros de suspensão ECM em uma seringa Luer-Lock de 3 mililitros e conecte um conjunto de infusão alado no orifício da seringa. Fixe a seringa dentro da bomba de seringa. Em seguida, prenda a agulha a um suporte de retorta e posicione a ponta da agulha verticalmente a uma distância de 4 a 6 centímetros do topo de um frasco Dewar de formato baixo.

Em seguida, conecte um eletrodo de garra jacaré na ponta da agulha, garantindo também que a pinça jacaré esteja conectada ao terminal positivo da fonte de alimentação de alta tensão. Dobre a tira de papel alumínio sobre a borda do balão de vácuo. Em seguida, prenda um segundo eletrodo de clipe jacaré na borda externa da folha. Conecte-o ao terminal da fonte de aterramento da fonte de alimentação.

Encha o frasco Dewar com nitrogênio líquido a aproximadamente 1 centímetro do topo, de modo que três quartos da folha fiquem submersos. Em seguida, ajuste a bomba de seringa para uma taxa de infusão de 30 mililitros por hora e eletropulverize as amostras de acordo com o protocolo de texto. Quando a infusão estiver concluída, despeje cuidadosamente o excesso de nitrogênio líquido do Dewar, deixando o microtransportador suspenso em aproximadamente 25 mililitros de nitrogênio líquido para garantir que permaneçam congelados.

Transfira imediatamente os microtransportadores com nitrogênio líquido para um tubo de centrífuga de 50 mililitros, despejando em um movimento suave. Em seguida, use uma escópula para coletar quaisquer microtransportadores congelados restantes no Dewar. Adicione-os ao tubo da centrífuga. Para se preparar para a liofilização, cubra o tubo da centrífuga com papel alumínio perfurado com pequenos orifícios. Coloque os tubos de centrífuga cobertos em um frasco liofilizador. Em seguida, conecte imediatamente o frasco ao liofilizador e seque as amostras durante a noite.