Ensaio de discriminação da população do lado do câncer: um método para isolar células-tronco cancerígenas usando o ensaio de efluxo de corante Hoechst

Um tumor contém uma pequena fração de células-tronco conhecidas como população lateral. Essas células são quimiorresistentes, tornando-as responsáveis pela recidiva do câncer.

Para isolar a população secundária de células cancerígenas, comece por adicionar Hoechst - uma solução de corante fluorescente - ao frasco para injetáveis que contém a suspensão de células cancerígenas. Dentro das células cancerígenas normais, as moléculas de Hoechst entram no núcleo e se ligam à região rica em A-T-no no DNA, levando a uma alta fluorescência nessas células.

Em contraste, a população lateral contém uma alta concentração de transportadores ABC - bombas de efluxo que removem rapidamente as moléculas de corante da célula. Esse efluxo ativo de moléculas de corante faz com que a população lateral fluoresça em baixa intensidade.

Agora, pegue outro frasco de células cancerígenas tratadas com Hoechst e adicione Verapamil a ele. Este frasco atua como um controle, pois o Verapamil bloqueia os transportadores ABC. Esta etapa causa uma redução no efluxo de Hoechst e retém o corante dentro das células da população lateral.

Em seguida, contra-core as células em ambos os frascos usando iodeto de propídio. O