Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:33 min. • April 30th, 2023
Scaffolds descelularizados derivados da matriz extracelular de tecido específico imitam seu microambiente extracelular nativo. Esses andaimes mantêm sua integridade estrutural e composição bioquímica e servem como plataformas promissoras para a engenharia de tecidos.
Para preparar um andaime esofágico suíno descelularizado, comece com um esôfago suíno recém-excisado. Dividir o esôfago longitudinalmente e enxaguá-lo com um tampão adequado para remover quaisquer detritos. Em seguida, prenda o esôfago com sua superfície mucosa, a camada mais interna, voltada para cima.
Separe a mucosa da submucosa subjacente em uma extremidade do esôfago. Disseque o esôfago longitudinalmente ao longo do tecido conjuntivo frouxo da mucosa chamado lâmina própria para separar completamente a superfície da mucosa da submucosa subjacente.
Além disso, excise as regiões proximal e distal da mucosa, que contêm uma maior densidade de glândulas submucosas e uma camada de lâmina própria mais espessa. Corte o tecido mucoso em pedaços de tamanho uniforme.
Trate o tecido com uma solução salina hipertônica suplementada com antibióticos. Os antibióticos ajudam a prevenir o crescimento bacteriano. Em alta concentração de solutos, a água sai das células e causa seu encolhimento. Esta etapa auxilia ainda mais na morte celular e no desprendimento da matriz extracelular.
Agora, retire suavemente o epitélio solto do tecido subjacente. Enxágue o tecido com tampão para remover os detritos celulares. Finalmente, incube o tecido em glicerol, o que facilita ainda mais a descelularização do tecido, desidratando e lisando as células, preservando a integridade da membrana basal.
Para preparar os andaimes esofágicos de porco descelularizados, comece usando uma tesoura e uma pinça para abrir o esôfago de porco longitudinalmente. Em seguida, lave o esôfago em um pote estéril de 180 mililitros contendo 100 mililitros de PBS estéril por 10 minutos com agitação suave para remover quaisquer detritos.
Enquanto o tecido está sendo enxaguado, borrife uma placa de dissecção de cortiça com etanol a 70%. Quando a rolha estiver seca, prenda o esôfago na placa com o lado da mucosa para cima. Agora, use uma pinça estéril para agarrar a superfície da mucosa em uma extremidade do esôfago e puxe o tecido para longe da placa para separar a mucosa da submucosa subjacente.
Em seguida, usando uma lâmina de bisturi estéril, disseque o esôfago longitudinalmente ao longo da lâmina própria, removendo os pinos à medida que a dissecção progride para permitir que a mucosa seja levantada. Descarte a submucosa subjacente e use um bisturi para cortar a mucosa restante em pedaços quadrados de 5 centímetros. Lave as peças em 150 mililitros de PBS estéril com agitação suave, como acabamos de demonstrar.
Após cinco minutos, transfira o tecido para um pote de 180 mililitros contendo 150 mililitros de solução de cloreto de sódio 1 molar suplementada com antibióticos a 37 graus Celsius. Após 72 horas, transfira o tecido para 150 mililitros de PBS estéril, momento em que o epitélio terá começado a se separar visivelmente do tecido subjacente.
Use uma pinça estéril e uma lâmina de bisturi para remover o epitélio descolante e coloque o tecido restante em um pote fresco de 150 mililitros de PBS estéril com três lavagens de cinco minutos com agitação suave. O tecido agora deve ser armazenado em glicerol por um período mínimo de quatro meses para esterilizar totalmente o andaime.