Modelo de Organoide de Tumor de Bexiga: Um Método para Transplante Ortotópico de Organoides de Bexiga para Bexiga Murina Receptora

Os organoides tumorais derivados do paciente são tumores em miniatura desenvolvidos a partir do órgão-mãe. No transplante para um modelo animal, esses organoides retêm a maioria das características fenotípicas e genéticas do tumor original, permitindo uma terapia personalizada contra o câncer. Por exemplo, organoides de câncer de bexiga são positivos para muitos marcadores celulares como seu tumor parental correspondente.

Para desenvolver um modelo de organoide tumoral, comece com uma cultura de organoides tumorais de bexiga. Adicione a suspensão da enzima colagenase à cultura organoide e incuba. A colagenase decompõe os componentes da matriz. Agora, adicione um meio de cultura pré-aquecido para liberar os organoides livres em suspensão. Centrifugue a baixa temperatura para neutralizar qualquer atividade residual da colagenase e obter o pellet organoide.

Rejeitar o sobrenadante que contém enzimas neutralizadas e componentes da matriz degradada e ressuspender o sedimento em meios frescos. Transfira a suspensão organoide para um meio de crescimento contendo a matriz da membrana basal. Em seguida, coloque a suspensão organoide e média em uma seringa e injete-a na parede anterior de uma bexiga de camundongo nua anestesiada e exposta cirurgicamente.

A complexa rede de matriz da membrana basal ajuda a aprisionar os organoides e facilita sua integração com a parede da bexiga. A parede da bexiga imita o microambiente do tumor parental, permitindo que os organoides se desenvolvam em um tumor que reflete a morfologia e a patogênese do câncer original.

Para preparar os organoides tumorais da bexiga para transplante ortotópico, adicione 500 microlitros de colagenase/dispase ao meio organoide em uma placa de 24 poços. Pipete a matriz da membrana basal e o meio para cima e para baixo. Em seguida, incube a placa por 20 minutos a 37 graus Celsius.

Após a incubação, reúna as células em um tubo de 15 mililitros e adicione 5 mililitros de DMEM pré-aquecido. Em seguida, centrifugue o tubo a 400 x g durante 3 minutos a 4 graus Celsius e aspire o sobrenadante. Ressuspenda o pellet com 1 mililitro de DMEM e transfira a solução para uma placa de Petri de 90 milímetros.

Sob um microscópio, pegue de 10 a 100 organoides tumorais com uma pipeta P200 e colete-os em um microtubo no gelo. Centrifugue o microtubo e remova cuidadosamente o sobrenadante. Em seguida, mantenha o pellet no gelo até que os camundongos estejam prontos para a cirurgia. Antes do transplante da parede da bexiga submucosa, mantenha as seringas, as pontas da pipeta e a matriz da membrana basal no gelo até a hora de usar.

Após o camundongo ter sido anestesiado, coloque-o em decúbito dorsal e mantenha a anestesia por inalação de máscara de isoflurano vaporizado a 2%. Aplique iodopovidona com uma gaze estéril e limpe-a com etanol 70%. Faça uma pequena incisão transversal na pele e na parede muscular da linha média inferior do abdômen com tesoura cirúrgica estéril. Exponha a bexiga da cavidade abdominal e apoie-a com um cotonete embebido em solução salina.

Ressuspenda os grânulos organoides em 80 microlitros de meio organoide contendo 50% de matriz de membrana basal de alta concentração e injete a suspensão na face anterior da cúpula da bexiga usando a seringa de insulina. Feche a incisão com uma sutura de náilon 4-0 e desinfete o local cirúrgico com iodopovidona e etanol 70%. Deixe o mouse se recuperar sob um irradiador infravermelho por 10 a 15 minutos. Em seguida, monitore o mouse novamente até que ele recupere a consciência.

• Bladder Organoid - Miniature tumors developed from parent organ for personalized therapies.
• Orthotopic Transplantation - Process of moving organoids to original location in animal model.
• 3D Organoid - Three-dimensional model of organoid mimicking the structure of original organ.
• Corning Dispase - Enzyme used to break down matrix components in organoid cultures.
• Tumor Transplantation - Process of transferring a tumor or organoid into an animal model.

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• Key Concepts – Techniques and principles behind organoid development (e.g., 3D organoid).
• Underlying Mechanisms – Procedures for transplanting organoids (e.g., orthotopic transplantation).
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