Análise de Patch-Clamp Perfurado Mediada por Anfotericina B: Uma Técnica Eletrofisiológica para Estudar Correntes Iônicas em Células da Bexiga Urinária

A técnica de patch-clamp perfurada permite medições em tempo real das correntes iônicas associadas à atividade dos canais iônicos em células como o músculo liso detrusor, ou DSM, células da bexiga urinária.

Para começar, carregue a suspensão da célula DSM em uma câmara de vidro e incube para permitir a aderência da célula. Em seguida, adicione uma solução extracelular contendo íons tetraetilamônio e césio às células aderidas. Esses cátions bloqueiam os canais de potássio na membrana celular e inibem as correntes de potássio interferentes.

Em seguida, pegue uma pipeta de patch clamp polida - um tubo de vidro oco fino contendo um eletrodo de gravação conectado a um amplificador. Encha a pipeta com uma solução intracelular e encha-a com a mesma solução, mas contendo anfotericina B, um antibiótico perfurante da membrana.

Agora, mergulhe a ponta da pipeta na solução extracelular contendo células DSM. Depois de definir o potencial e a corrente para níveis apropriados, avance a ponta da pipeta em direção à membrana celular e monitore simultaneamente a resistência do eletrodo.

Um rápido aumento no valor da resistência indica que a ponta da pipeta atingiu a membrana celular. Agora, aplique