Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:15 min. • April 30th, 2023
A calvária é a parte superior do crânio, que cobre e protege a cavidade craniana - o espaço oco dentro do crânio que envolve o cérebro. Consiste em cinco ossos conectados por tecido fibroso chamado suturas, incluindo as suturas coronal, sagital e lambdoide.
Para gerar uma janela de calibração para acessar o cérebro, primeiro pegue um camundongo anestesiado com a cabeça raspada.
Prenda o animal em uma unidade estereotáxica, estabilizando seu crânio. Mantenha a temperatura corporal usando uma almofada de aquecimento.
Em seguida, esterilize o couro cabeludo e faça uma pequena incisão ao longo da porção mediana central do crânio.
Em seguida, orientar a broca perpendicularmente ao bregma - ponto de intersecção das suturas coronal e sagital.
Posicione a broca na área pretendida, a uma distância adequada do bregma.
Inicie cuidadosamente a broca no crânio, umedecendo o local alvo para evitar danos aos tecidos devido ao acúmulo de calor.
Perfure com profundidade rasa através da calvária para formar a janela da calvária.
Uma vez criada a janela, o mouse pode ser usado para outros procedimentos experimentais.
Antes de iniciar o procedimento, gire a trava da broca para permitir que um adaptador de broca e uma broca estéril de 1 milímetro sejam inseridos na broca e aperte manualmente as travas da broca para travar a broca. Prenda a broca ao quadro estereotáxico.
Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo pedal, coloque o mouse anestesiado na estrutura e use a ponta romba de um aplicador de ponta de algodão para posicionar os dentes na calha da barra bucal.
Pressione a barra da orelha esquerda contra o canto medial da orelha esquerda para estabilizar o crânio e use o parafuso na estrutura estereotáxica para travar o crânio no lugar. Em seguida, prenda o outro lado do crânio com a barra da orelha direita da mesma maneira.
Para fazer uma janela de calvária, limpe o couro cabeludo com três soluções sequenciais de betadina alternadas e esfoliantes com etanol a 70% e use um bisturi estéril para fazer uma incisão de 3 milímetros através da pele ao longo do aspecto mediano central do crânio seguindo a linha de sutura sagital.
Identifique e oriente a broca estéril perpendicularmente ao bregma, certificando-se de redefinir a escala digital Vernier para zero e mova a broca 2 milímetros lateralmente à sutura sagital e 1 milímetro anterior à sutura coronal.
Afaste a pele da broca e, usando a velocidade mais alta e prestando atenção aos pontos de referência, faça um furo com cerca de 0,5 milímetros de profundidade na calvária, resfriando o local da broca com gotas de solução salina estéril, conforme necessário.
Uma vez feita a janela calvarial, levante cuidadosamente a broca e remova a broca da estrutura estereotáxica.