JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 3:24 min • April 30th, 2023
Na doença leptomeníngea, as células cancerígenas de outros órgãos do corpo metastatizam para líquido cefalorraquidiano ou LCR contido nas leptomeninges - finas camadas de tecido ao redor do cérebro.
A injeção intracerebroventricular facilita a administração direta do medicamento no LCR, evitando a barreira hematoencefálica.
Para começar, prepare um camundongo anestesiado em decúbito ventral.
Incise a cabeça para revelar o crânio. Localize o bregma - o ponto de junção das suturas coronal e sagital.
Usando uma microbroca, faça um furo no crânio a uma distância apropriada do bregma para acessar a camada meníngea mais externa do tecido conjuntivo denso - a dura-máter.
Em seguida, insira suavemente o ommaya - uma pequena porta de injeção - no orifício.
Uma vez feito isso, suture a pele ao redor e permita que o ommaya se fixe por um período ideal.
Em seguida, conecte a seringa cheia com a suspensão desejada do medicamento ao ommaya.
Depois de definir uma taxa de fluxo adequada, injete a suspensão do medicamento na dura-máter.
O ommaya fornece uma via estéril para a administração direta do medicamento no LCR nos ventrículos cerebrais do cérebro.
Agora, retire a seringa e deixe o ommaya intacto no crânio para a dosagem subsequente.
Permita que o mouse se recupere.
Com o tempo, as moléculas do medicamento migram para o local do câncer e impedem o crescimento e a proliferação de células cancerígenas.
Monte o dispositivo de injeção Murine Ommaya usando uma porta de injeção em miniatura de 25G e um disco espaçador de 1 milímetro.
Use um adesivo estéril de cianoacrilato para garantir a penetração de aproximadamente 2,5 milímetros da cânula metálica no hemisfério cerebral direito e prepare a pele de acordo com a técnica estéril.
Faça uma pequena incisão na pele, seguida de dissecção romba dos tecidos subcutâneos subjacentes para expor o crânio. Seque o crânio usando bastões aplicadores com ponta de algodão embebidos em peróxido de hidrogênio.
Faça um orifício de 0,9 milímetros no crânio, 0,5 milímetros posterior e 1,1 milímetros lateral da bregma, para expor a dura-máter.
Mova a microbroca para o lado e marque suavemente o osso imediatamente ao redor do orifício da rebarba. Fixe uma porta de injeção no crânio usando um adesivo estéril de cianoacrilato e insira-o a uma profundidade de aproximadamente 2,5 milímetros.
Suturar a incisão usando suturas de náilon não absorvíveis 4-0 em um padrão de ponto interrompido ou sutura de cordão de bolsa. Alojar camundongos pós-operatórios em gaiolas individuais para recuperação.
Para dosar o mouse, acesse o Murine Ommaya usando um adaptador de injeção de porta e uma seringa Hamilton. Usando uma pinça, segure a parte superior da porta de injeção em miniatura e insira cuidadosamente o adaptador do injetor de porta totalmente no septo da porta.
Uma vez feita a injeção, retire o Murine Ommaya do adaptador de injeção de porta com uma pinça.