Modelo de células-tronco de glioma marcado com luciferase: um método mediado por lentivírus para preparar células-tronco de glioma marcadas com luciferase para estudos terapêuticos in vitro

As células-tronco do glioma ou GSCs são uma subpopulação de glioma - um câncer de células gliais no cérebro.

A marcação dessas GSCs com enzimas bioluminescentes como a luciferase ajuda a estabelecer ensaios de imagem de alto rendimento para triagem de drogas.

Para preparar GSCs marcados com luciferase, comece com uma cultura de GSCs em um meio de crescimento adequado.

Centrifugue a cultura para obter um pellet celular e remova o sobrenadante.

Adicione enzimas digestivas adequadas ao pellet. Essas enzimas dissociam aglomerados de células e degradam quaisquer vestígios de tecido conjuntivo para obter uma suspensão unicelular.

Agora, centrifugue a suspensão de célula única e remova o sobrenadante. Ressuspenda o pellet em um meio fresco.

Em seguida, semeie a concentração desejada de células em uma placa de cultura.

Incube a cultura e permita que as células adiram à placa de cultura.

Posteriormente, adicione o título desejado de uma construção de gene contendo vírus para proteína fluorescente verde aprimorada com luciferase ou EGFP e incube.

O vírus interage com os receptores de superfície das GSCs, desencadeando a liberação de RNA viral contendo luciferase-EGFP. As enzimas celulares ca