Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 6:23 min. • April 30th, 2023
Microglia são macrófagos cerebrais que ajudam a remover patógenos, detritos celulares e células nervosas cancerígenas ou neuroblastoma por um processo chamado fagocitose.
Para mimetizar a fagocitose in vitro, comece com uma cultura de células de neuroblastoma fixadas em paraformaldeído.
O paraformaldeído, um fixador químico, causa distribuição aleatória de fosfolipídios de membrana como a fosfatidilserina, resultando em sua translocação para a superfície externa da membrana celular e, ao mesmo tempo, estabilizando a estrutura celular.
Agora, adicione um corante fluorescente reativo à amina sensível ao pH à cultura de células de neuroblastoma e incuba.
As moléculas de corante se ligam aos grupos amina da fosfatidilserina na superfície celular do neuroblastoma.
Centrifugar o tubo e remover o sobrenadante que contém as moléculas de corante não ligadas. Enxágue o pellet celular com um tampão adequado e centrifugue.
Remover o sobrenadante e ressuspender o sedimento no meio de cultura.
Em seguida, semeie macrófagos pré-corados em uma placa de cultura. Os macrófagos corados aparecerão em vermelho com um núcleo azul.
Adicione células de neuroblastoma coradas a esta cultura e incuba.
Os rec
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