Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:55 min. • April 30th, 2023
Para isolar núcleos, comece coletando uma amostra de glioma congelada fresca - um tumor que se origina nas células gliais do cérebro - em uma placa de Petri.
Coloque a placa de Petri no gelo para evitar a degradação do tecido.
Em seguida, pique a amostra de tecido em pedaços pequenos.
Adicione um tampão de lise pré-resfriado aos pedaços de tecido picados. Transfira a mistura para um homogeneizador Dounce. Usando o pilão, homogeneizar o tecido para desintegrar as células e iniciar a lise.
Agora, transfira o homogeneizado para um tubo de microcentrífuga contendo um tampão de lise fresco.
Interrompa mecanicamente o homogenato usando uma ponta de pipeta de diâmetro largo. Esta etapa facilita a liberação de organelas citoplasmáticas das células.
Posteriormente, usando um filtro de células de tamanho apropriado, filtre o homogeneizado em um tubo novo para remover detritos de tecido e outros contaminantes.
Após a filtração, pegue o filtrado contendo várias organelas celulares.
Centrifugue o filtrado em baixa velocidade para granular os núcleos mais densos na parte inferior, enquanto as outras organelas celulares permanecem no sobrenadante.
Descarte o sobrenadante contendo organela. Armaze
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