Purificação de Núcleos Baseada em Centrifugação de Gradiente: Uma Técnica para Obter Fração Ultrapura de Núcleos Intactos Usando Centrifugação de Gradiente de Densidade

Para isolar e purificar núcleos intactos, comece tomando uma fração bruta de núcleos em um tubo. A fração contém núcleos intactos, juntamente com fragmentos de núcleos quebrados e detritos.

Misturar esta fracção com um meio de gradiente de densidade adequado, de modo a formar uma suspensão da concentração mais baixa.

Agora, soluções de camadas de densidades crescentes do mesmo meio de gradiente abaixo da fração de núcleos brutos pré-preparada para gerar um gradiente de densidade descontínuo de várias etapas. Esta etapa permite que a fração de núcleos brutos forme uma banda no topo do gradiente.

Em seguida, centrifugue o tubo em baixa velocidade.

Com base nas diferenças de forma e massa, os núcleos intactos migram de maneira diferente em comparação com detritos e fragmentos nucleares. Isso resulta em núcleos intactos formando uma banda separada.

Após a centrifugação, localize a banda distinta que consiste em núcleos intactos na interface das soluções de gradiente de densidade.

Usando uma pipeta, aspire as camadas superiores do gradiente para facilitar o acesso à banda de núcleos puros. Recolher a banda que contém os núcleos num novo tubo.

Visualize esses núcleos sob um microscópio d