Fixação e coloração de seção de tecido criopreservado: um procedimento para processar seções de tecido cerebral congelado para microdissecção a laser

0 views • 2:41 min • April 30th, 2023

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Para diferenciar populações de células específicas em um tecido tumoral cerebral de camundongo heterogêneo para seu isolamento subsequente, comece pegando uma lâmina de vidro carregando a seção de tecido tumoral cerebral criopreservado de interesse.

Incubar sequencialmente o tecido em concentrações decrescentes de etanol. O etanol dissolve o meio de incorporação que penetrou no tecido e fixa o tecido, mantendo a integridade do ácido nucleico.

Além disso, o etanol reidrata o tecido, permitindo uma coloração uniforme durante as etapas subsequentes.

Agora, trate o tecido com violeta Cresyl. O violeta cresil - um corante básico - cora componentes celulares ácidos, como ácidos nucléicos.

Depois disso, contra-core o tecido com Eosina Y. A Eosina Y - um corante ácido - cora componentes celulares básicos, como proteínas citoplasmáticas.

Essa etapa de coloração diferencial ajuda a distinguir entre o citoplasma e outras estruturas celulares, permitindo a identificação de células de interesse.

Após a coloração, mergulhe o tecido em concentrações crescentes de etanol para desidratar o tecido e evitar distorção excessiva do tecido.

Em seguida, lave o lenço com xileno. O xileno desloca e remove o etanol da seção do tecido.

Por fim, adicione uma solução de montagem adequada na seção de tecido para preservar a morfologia do tecido.

A seção de tecido processado está pronta para ser usada para microdissecção a laser - um processo que permite o isolamento preciso de células específicas do tecido.

Mergulhe as lâminas em imersões sequenciais de etanol descendente de 30 segundos, seguidas de coloração com solução de cristal violeta por 20 segundos e 5 segundos em solução de eosina Y a 0,5%.

No final da incubação da eosina Y, use papel de filtro para secar as lâminas e desidratá-las em imersões sequenciais ascendentes de etanol. Após a imersão em etanol de 60 segundos, enxágue as lâminas em um recipiente de xileno por 3 minutos.

Em seguida, seque as lâminas em superfície livre de RNase à temperatura ambiente por 10 segundos antes de montar as amostras em meio de montagem preparado com água livre de RNase. Após 10 a 20 segundos, transfira as lâminas para a plataforma de microdissecção do microscópio.

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Last updated: 18 July 2026