Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:41 min. • April 30th, 2023
Para diferenciar populações de células específicas em um tecido tumoral cerebral de camundongo heterogêneo para seu isolamento subsequente, comece pegando uma lâmina de vidro carregando a seção de tecido tumoral cerebral criopreservado de interesse.
Incubar sequencialmente o tecido em concentrações decrescentes de etanol. O etanol dissolve o meio de incorporação que penetrou no tecido e fixa o tecido, mantendo a integridade do ácido nucleico.
Além disso, o etanol reidrata o tecido, permitindo uma coloração uniforme durante as etapas subsequentes.
Agora, trate o tecido com violeta Cresyl. O violeta cresil - um corante básico - cora componentes celulares ácidos, como ácidos nucléicos.
Depois disso, contra-core o tecido com Eosina Y. A Eosina Y - um corante ácido - cora componentes celulares básicos, como proteínas citoplasmáticas.
Essa etapa de coloração diferencial ajuda a distinguir entre o citoplasma e outras estruturas celulares, permitindo a identificação de células de interesse.
Após a coloração, mergulhe o tecido em concentrações crescentes de etanol para desidratar o tecido e evitar distorção excessiva do tecido.
Em seguida, lave o lenço com xileno. O xileno desloca e remove o etanol da seção do tecido.
Por fim, adicione uma solução de montagem adequada na seção de tecido para preservar a morfologia do tecido.
A seção de tecido processado está pronta para ser usada para microdissecção a laser - um processo que permite o isolamento preciso de células específicas do tecido.
Mergulhe as lâminas em imersões sequenciais de etanol descendente de 30 segundos, seguidas de coloração com solução de cristal violeta por 20 segundos e 5 segundos em solução de eosina Y a 0,5%.
No final da incubação da eosina Y, use papel de filtro para secar as lâminas e desidratá-las em imersões sequenciais ascendentes de etanol. Após a imersão em etanol de 60 segundos, enxágue as lâminas em um recipiente de xileno por 3 minutos.
Em seguida, seque as lâminas em superfície livre de RNase à temperatura ambiente por 10 segundos antes de montar as amostras em meio de montagem preparado com água livre de RNase. Após 10 a 20 segundos, transfira as lâminas para a plataforma de microdissecção do microscópio.